葛根素对小白鼠乳房发育的影响及其作用机理的研究

论文摘要

葛根素（Puerarin ）为豆科葛属植物葛根异黄酮的主要有效成分之一,其化学名为4/,7-二羟基-8-β-D-葡萄糖醛基异黄酮,目前尚未见到有葛根素对乳腺发育影响的研究报道。本文旨在为葛根素的开发利用提供理论依据,为寻找治疗产科疾病的药物提供新途径。其主要内容包括:（1）葛根素对小白鼠体重、乳腺发育及泌乳功能的影响采用组织学和药理学实验方法,探讨了不同剂量葛根素对雌性小白鼠体重增重、乳腺组织指数、泌乳量的影响,探讨了葛根素对正常小白鼠乳腺发育及泌乳的影响。结果显示:葛根素对小鼠乳腺导管数目即乳腺导管分支生长具有显著的促进作用（P<0.01）;葛根素对小鼠乳腺实质发育具有促进作用。葛根素对小鼠仔鼠的体重有一定的增加作用,但差异不显著（P>0.05）;葛根素对小鼠泌乳量有提高趋势,但差异不显著（P>0.05）。（2）葛根素对血清激素含量的影响采用放射免疫法,测定了血清中各种激素含量,探讨了葛根素对正常小鼠血清中各种激素的调节作用。结果显示:葛根素对小白鼠血清中雌二醇、孕酮、催乳激素含量无显著的影响（P>0.05）;而使血清中生长激素的含量极显著升高。（P<0.01）。提示,提高血清中生长激素含量是葛根素促乳腺发育的作用机理之一。（3）葛根素对卵巢摘除小鼠乳腺及其激素含量的影响采用组织学和放射免疫分析法,研究了葛根素对青春期卵巢摘除小鼠乳腺发育及血清激素含量的影响。结果显示:摘除幼龄小鼠卵巢后,小鼠卵巢分泌激素的靶器官——乳腺发育停止;与正常小白鼠相比,血清中的雌二醇和孕酮含量均降低（P<0.05）,但生长激素含量升高（P<0.05）;口服外源性激素（已烯雌酚和孕酮）后,乳腺得到重新发育。口服葛根素后乳腺发育不显著,但抑制了因卵巢摘除而引起的血清生长激素的升高。因此提示,葛根素对乳腺组织不产生雌激素样作用,但对血清生长激素具有调节作用。（4）葛根素对乳腺组织雌激素及孕酮受体基因表达的影响采用实时定量PCR方法,阐明了葛根素对小白鼠乳腺组织中雌二醇受体及孕酮受体基因表达的影响。结果显示:与对照组相比,实验组小鼠ER表达量显著的增加（p<0.05）,PR表达量无显著性变化（p> 0.05）。提示,葛根素使乳腺组织中雌二醇受体基因表达量提高是其促乳腺发育的作用机理之一。本研究的主要结论如下:（1）葛根素对青春期小鼠的体重有增重的趋势,尤其对卵巢摘除小白鼠体重有显著的增加作用。（2）葛根素具有促进小白鼠乳腺导管的发育的作用;而对卵巢摘除小白鼠乳腺却无显著影响。（3）葛根素对小白鼠生长激素含量有显著的提高作用,而且对卵巢摘除激素平衡失调引起的生长激素含量过高有调节作用。（4）葛根素能够显著提高小鼠乳腺组织中的雌二醇受体基因表达量。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 乳腺形态结构与乳腺发育的调控
• 1.1.1 乳腺形态结构
• 1.1.2 乳腺的发育及调控
• 1.1.2.1 雌激素与乳腺发育
• 1.1.2.2 孕激素与乳腺发育
• 1.1.2.3 生长激素与乳腺发育
• 1.1.2.4 催乳素（PRL）与乳腺发育
• 1.1.2.5 其他激素与乳腺发育
• 1.1.2.6 雌激素受体和孕激素受体与乳腺发育
• 1.2 植物雌激素研究概况
• 1.2.1 植物雌激素的促乳腺作用
• 1.3 葛根素的研究概况
• 1.3.1 葛根素的来源与化学结构
• 1.3.2 葛根素的药理学研究概况
• 1.4 本课题研究目的和意义
• 2 试验研究
• 2.1 葛根素对小白鼠体重、乳腺发育及泌乳功能的影响
• 2.1.1 葛根素小白鼠对体重、乳腺发育的影响
• 2.1.1.1 试验材料
• 2.1.1.2 数据分析
• 2.1.2 方法
• 2.1.2.1 试分组情况
• 2.1.2.2 给药方法
• 2.1.2.3 小白鼠体重检测
• 2.1.2.4 小白鼠乳腺发育指标的检测
• 2.1.3 结果
• 2.1.3.1 葛根素对小鼠体重（增重值）及乳腺重量（重量比值）的影响
• 2.1.3.2 葛根素对乳腺组织结构的影响
• 2.1.3.3 葛根素对小鼠乳腺实质、乳腺域及其百分比的影响
• 2.1.3.4 葛根素对小鼠乳腺导管数量的影响
• 2.1.3.5 葛根素对小鼠泌乳量的影响
• 2.1.3.6 葛根素对仔鼠体重的影响
• 2.1.4 讨论
• 2.1.4.1 关于葛根素对小鼠体重增重的影响
• 2.1.4.2 关于葛根素对小鼠乳腺发育的影响
• 2.1.4.2.1 对乳腺组织重量及其与体重百分比的影响
• 2.1.4.2.2 对乳腺实质、乳腺域及其百分比的影响
• 2.1.4.2.3 对乳腺导管发育的影响
• 2.1.4.3 葛根素对泌乳量及仔鼠体重增长的影响
• 2.1.5 小结
• 2.2 葛根素对血清激素含量的影响
• 2.2.1 材料与方法
• 2.2.1.1 试验材料
• 2.2.1.2 数据分析
• 2.2.2 方法
• 2.2.2.1 试分组情况
• 2.2.2.2 给药方法
• 2.2.3 小鼠血清中孕酮（P）含量的检测
• 2）含量的检测'>2.2.3.1 小鼠血清中雌二醇（E₂）含量的检测
• 2.2.3.2 小鼠血清中生长激素（GH）含量的检测
• 2.2.3.3 小鼠血清中催乳素（PRL）含量的检测
• 2.2.4 结果
• 2.2.4.1 葛根素对小鼠血清中孕酮（P）含量的影响
• 2.2.4.2 葛根素对小鼠血清雌二醇（E2）含量的影响
• 2.2.4.3 葛根素对小鼠血清中生长激素（GH）含量的影响
• 2.2.4.4 葛根素对小鼠血清中催乳素（PRL）含量的影响
• 2.2.5 讨论
• 2.2.5.1 葛根素对小鼠血清孕酮（P）含量的影响
• 2.2.5.2 葛根素对小鼠血清雌二醇（E2）含量的影响
• 2.2.5.3 葛根素对小鼠血清生长激素（GH）含量的影响
• 2.2.5.4 葛根素对小鼠血清催乳素（PRL）含量的影响
• 2.2.6 小结
• 2.3 葛根素对摘除卵巢小鼠乳腺及其激素含量的影响
• 2.3.1 实验材料
• 2.3.1.1 实验动物
• 2.3.1.2 药品与试剂
• 2.3.1.3 主要仪器设备
• 2.3.1.4 数据分析
• 2.3.2 实验方法
• 2.3.2.1 双侧卵巢摘除小鼠模型的建立
• 2.3.2.2 动物分组及给药
• 2.3.3 检测卵巢摘除小鼠体重及乳腺发育指标的测定
• 2.3.3.1 小鼠血清中雌二醇（E2）含量的测定
• 2.3.3.2 小鼠血清中孕酮（P）含量的测定
• 2.3.3.3 小鼠血清中生长激素（GH）含量的测定
• 2.3.3.4 小鼠血清中催乳素（PRL）含量的测定
• 2.3.4 结果
• 2.3.4.1 葛根素对卵巢摘除小鼠体重的影响
• 2.3.4.2 葛根素对摘除卵巢小鼠乳腺重量及乳腺系数的影响
• 2.3.4.3 葛根素对摘除卵巢小鼠乳腺实质、乳腺域、乳腺实质/乳腺域的影响
• 2含量的影响'>2.3.4.4 葛根素对摘除卵巢小鼠血清 E₂含量的影响
• 2.3.4.5 葛根素对摘除卵巢小鼠血清中孕酮（P）含量的影响
• 2.3.4.6 葛根素对摘除卵巢小鼠血清中生长激素（GH）含量的影响
• 2.3.4.7 葛根素对摘除卵巢小鼠血清中催乳素（PRL）含量的影响
• 2.3.5 讨论
• 2.3.5.1 葛根素对摘除卵巢小鼠体重及乳腺发育的影响
• 2.3.5.2 葛根素对摘除卵巢小鼠血清雌二醇（E2）含量的影响
• 2.3.5.3 葛根素对摘除卵巢小鼠血清中孕酮（P）含量的影响
• 2.3.5.4 葛根素对摘除卵巢小鼠血清中生长激素（GH）含量的影响
• 2.3.5.5 葛根素对摘除卵巢小鼠血清中催乳素（PRL）含量的影响
• 2.3.5 小结
• 2.4 葛根素对乳腺组织雌激素及孕酮受体基因表达的影响
• 2.4.1 实验材料
• 2.4.1.1 实验动物
• 2.4.1.2 主要仪器和试剂
• 2.4.1.3 数据分析
• 2.4.2 方法
• 2.4.2.1 实验分组情况及给药方法
• 2.4.2.2 PCR 引物的设计及合成
• 2.4.2.3 小鼠乳腺组织总 RNA 的提取
• 2.4.2.4 荧光定量 RT-PCR 方法检测小鼠孕酮和雌激素受体的基因表达
• 2.4.3 结果
• 2.4.3.1 荧光定量 RT-PCR 方法检测在小鼠乳腺组织中目的受体基因的表达
• 2.4.3.1.1 荧光定量 RT-PCR 检测目的受体基因表达的电泳结果
• 2.4.3.1.2 目的受体基因的荧光定量 RT-PCR 产物测序结果
• 2.4.3.1.3 荧光定量 RT-PCR 检测目的受体基因表达相关曲线状况的评价
• 2.4.3.1.4 目的受体和β-Actin 基因表达荧光定量 RT-PCR 熔解曲线状况
• 2.4.3.1.5 目的受体和β-Actin 基因表达荧光定量 RT-PCR 扩增效率曲线状况
• 2.4.3.1.6 目的受体基因的荧光定量 RT-PCR 产物 Ct 值
• 2.4.4 讨论
• 2.4.5 小结
• 3 全文讨论
• 3.1 葛根素对体重及乳腺发育的影响
• 3.2 葛根素对血清激素含量的影响
• 3.2.1 葛根素对小鼠血清雌二醇（E2）含量的影响
• 3.2.2 葛根素对小鼠血清孕酮（P）含量的影响
• 3.2.3 葛根素对小鼠血清生长激素（CH）含量的影响
• 3.2.4 葛根素对小鼠血催乳素（PRL）含量的影响
• 3.3 葛根素对乳腺组织中激素受体基因表达的影响
• 4. 全文结论
• 本论文主要创新之处
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介