导读:本文包含了突变主动外排论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:鲍曼不动杆菌,替加环素,转座子,耐药机制
突变主动外排论文文献综述
曲俊彦,吕晓菊[1]（2014）在《插入突变法探索鲍曼不动杆菌对替加环素非主动外排的其他耐药机制》一文中研究指出目的:探索影响鲍曼不动杆菌对替加环素耐药性变化的因素。方法:通过电转化法构建鲍曼不动杆菌的EZ-Tn5插入突变株库,对转化子进行替加环素敏感性测定,筛选出替加环素耐药菌株,反向PCR技术分析替加环素耐药突变株的侧翼序列。结果:共挑选并保存了656株突变株构建鲍曼不动杆菌Tn5插入突变株文库。Tn5插入突变株文库中共筛选出25株替加环素耐药鲍曼不动杆菌,随机选取其中的12株进行反向PCR、测序分析,其中有3株插入dinB基因,1株插入23S rRNA基因,1株插入SMP-30基因,1株插入OmpW基因,1株插入PqqE基因,1株插入LidP基因;4株插入未知功能蛋白基因。结论:成功构建鲍曼不动杆菌Tn5插入突变株文库。首次在鲍曼不动杆菌中发现可能介导对替加环素耐药的几个新的基因,其具体耐药机制尚需进一步研究。(本文来源于《第十二届全国化疗药理学术研讨会会议论文集》期刊2014-07-28）
任静朝[2]（2010）在《志贺菌主动外排泵acrAB-tolC及调控基因marOR突变与耐药的关系》一文中研究指出随着抗生素的应用,志贺菌耐药现象日益普遍,给细菌性痢疾的防治工作带来了一定困难。研究表明细菌的耐药机制涉及多个方面,其中主动外排泵可能起着较重要的作用。本课题组的前期研究已证实志贺菌中也存在AcrAB-Tolc主动外排泵及其调控基因marOR。在对acrAB-tolc泵基因的研究中,发现耐多药株的acrA mRNA水平明显高于敏感株,但acrAB-tolC基因突变株与未突变株中,其mRNA水平的差异无统计学意义；在对调控基因marOR的研究中发现,该基因第1376-1379位点有4个碱基的缺失存在于志贺菌耐多药菌株中而不存在于敏感株和参考株中,从而推测该基因突变可能引起外排泵表达水平增高,进而影响志贺菌的耐药性。目的在前期研究的基础上,本课题旨在研究志贺菌marOR、acrA、acrB和tolC基因的突变情况,调控基因marOR的突变对AcrAB-Tolc主动外排泵表达的影响及其与细菌耐药的关系。方法1.菌株鉴定：在LB平板上划线复苏志贺菌菌株并重新进行血清学及生化鉴定。2.药物敏感试验：采用Kinby-Bauer纸片琼脂扩散法,质控菌为ATCC25922。3.有机溶剂耐受试验：能够在正己烷与环己烷比例为3：1的混合溶液中生长的菌株视为有机溶剂耐受菌株。4.志贺菌marOR、acrA、acrB和tolC基因单链构象多态性(PCR-SSCP)分析：PCR扩增marOR、acrA、acrB和tolC基因,并进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,硝酸银染色,观察其单链构象多态性并照相。5.核酸序列分析：根据SSCP分析结果,选择11株突变株和1株敏感株、1株参考株进行marOR基因测序。6.志贺菌acrAB-tolC基因转录水平分析：利用TRIzol提取志贺菌的总RNA,按照逆转录试剂盒说明书进行第一链合成，PCR扩增目的片断,利用凝胶成像分析系统检测marOR突变组与未突变组中acrAB-tolC相对含量。7.志贺菌株4个碱基缺失的marOR基因克隆及4个碱基缺失联合3个点突变的marOR基因克隆：利用重迭延伸PCR扩增4个碱基缺失的marOR基因,与T载体连接后转入DH5a,得到4个碱基缺失的克隆株；4个碱基缺失联合3个点突变的克隆株是直接扩增具有该突变菌株的marOR基因然后与T载体连接后转入DH5a所得。最后进行核酸序列分析进行证实。8. marOR基因不同突变对细菌耐药性的影响：检测DH5a、转入T载体后的DH5a、完整marOR基因的DH5a克隆株、4个碱基缺失的DH5a克隆株及4个碱基缺失联合3个点突变的DH5a克隆株对多种抗生素的耐药性,并进行比较。结果1.志贺菌菌株耐药性检测：159株志贺菌临床分离株对TE、C、AM、GM、NOR和SMZ-TMP等6种药物的药敏试验结果,敏感株4株,耐单药株18株,耐多药株137株,耐多药率为86.2%。2.有机溶剂耐受试验：159株志贺菌中有122株对有机溶剂耐受,耐受率为76.7%。耐单药株的有机溶剂耐受率为83.3%,耐多药株的有机溶剂耐受率为75.9%。3.志贺菌marOR、acrA、acrB和tolC基因单链构象多态性(PCR-SSCP)分析：在159株志贺菌临床分离株中,4株敏感株未发现marOR、acrA、acrB和tolC基因突变；155株耐药株中,marOR基因的突变率为17.4%；acrA基因的突变率为5.8%；acrB基因的突变率为3.9%；tolC基因的突变率为2.6%。4.核酸序列分析：对参考株、敏感株(Z10)和11株marOR基因突变株的测序发现,与敏感株和参考株比较,8株突变株均存在1376-1379位点的4个碱基(CATT)缺失和3处点突变；另外3株耐药菌株中,菌株200011存在1381-1384位点的4个碱基(ATTT)缺失和包括以上3处点突变的多处点突变(与敏感株的匹配度仅有86%),菌株Z23存在5处点突变,菌株Z24存在2处点突变。5.志贺菌acrAB-tolC基因转录水平分析结果：凝胶成像分析表明,突变组acrA、acrB、tolC表达的相对含量明显高于未突变组acrA、acrB、tolC的相对含量,P<0.05,差异有统计学意义。6. marOR突变基因克隆：经过PCR扩增、基因克隆和核酸测序证实,已成功获得空载体克隆、无突变marOR基因、4个碱基缺失突变marOR基因及4个碱基缺失联合3个点突变marOR基因的克隆,分别记为DH5a(T)、DH5a(marOR)、DH5a(marOR-ACTT)、DH5a(marOR-ACTT+3m)。7. marOR突变对细菌耐药性的影响：按抑菌环直径相差5mm以上为抗生素耐药性有差别：与DH5a(T)比较,DH5a(marOR-ACTT)对链霉素、妥布霉素、先锋V、头孢氨苄的耐药性增加,DH5a(marOR-ACTT+3m)对链霉素和四环素的耐药性增加；与DH5a(marOR)比较,DH5a (marOR-ACTT)和DH5a(marOR-ACTT+3m)对链霉素、四环素、氯霉素、先锋V、左氟沙星、环丙沙星和氟哌酸的耐药性增加；DH5a(marOR-CATT)与DH5aT(marOR-CATT+3m)相比对除甲氧苄啶外的实验所用抗生素的抑菌环直径无明显差异。结论1.在志贺菌耐药菌株中,marOR基因的突变率较高。在检测的11株志贺菌耐多药菌株中,8株marOR基因第1376-1379处有4个碱基的缺失和3个点突变,而该缺失突变和点突变不存在于敏感株和参考株中。2. marOR基因突变的志贺菌的acrAB-tolC基因转录水平明显高于未突变菌株。3. marOR基因第1376-1379处的4个碱基缺失,使志贺菌对部分抗生素的耐药性增加。4. marOR基因第1411、1417、1435处的点突变对志贺菌的耐药性的影响较小。(本文来源于《郑州大学》期刊2010-06-01）
魏志华[3]（2010）在《多药耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM主动外排系统的耐药作用及其调控基因mexR的突变情况》一文中研究指出目的1了解MexAB-OprM主动外排系统在本地区多药耐药铜绿假单胞菌中的耐药作用;2了解MexAB-OprM主动外排系统调控基因mexR的突变情况。材料与方法菌株来源收集2006年1月～2007年12月安徽医科大学第一附属医院临床标本中分离出的铜绿假单胞菌120株,经美国MicroScan WalkAWay-40全自动微生物分析仪鉴定(剔除来自同一患者的重复株)。质控菌株大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853购自卫生部药品生物制品检定所,大肠埃希菌( ECO) JM109为实验室保存菌株,铜绿假单胞菌野生株(PA01)由上海华山医院馈赠。方法参照美国临床实验室标准化研究所(CLSI)用琼脂稀释法测定120株铜绿假单胞菌对14种常见抗菌药物的最低抑菌浓度,挑选26株多药耐药菌株和15株敏感菌株;基于SYBR GreenⅠ荧光探针技术,构建克隆载体pMD18-T-mexB和pMD18-T-16SrDNA作为标准品,采用实时荧光定量PCR法检测MexAB-OprM主动外排系统内膜转运蛋白MexB的结构基因mexB和内参照基因16SrDNA的mRNA水平;联合L-酚丙氨基-L-氨基酰-β-萘胺(MC-207,110)和环丙沙星(CIP),测定26株多药耐药铜绿假单胞菌的MIC,筛选外排表型阳性的铜绿假单胞菌;用PCR扩增外排表型阳性菌株的MexAB-OprM主动外排系统调控基因mexR并对其产物测序,结果经Blast比对,判断其突变情况。结果120株铜绿假单胞菌中有26株对这14种常用抗菌药物全部耐药,有15株对这14种常用抗菌药物全部敏感,野生株、多药耐药菌株和敏感菌株均检测出mexB的mRNA基因,经统计学分析,多药耐药菌株的mexB mRNA水平(2.41±1.10)显着高于敏感菌株(1.47±0.83)(P<0.01)。联合MC-207,110后有20株多药耐药铜绿假单胞菌(76.9%)对CIP的MIC值下降4倍及以上,其中有15株mexR基因发生变异,13株发生点突变,出现氨基酸替换,2株发生插入突变,导致氨基酸插入,点突变位点是336G-A,603G-A,660G-A,584C-G,653T-A,后两者导致氨基酸替换103Ala—Gly 126Val—Glu,插入突变是在470和474核苷酸间插入碱基GGC,导致66和68氨基酸间插入Ala。结论MexAB-OprM主动外排系统表达水平的增高与本地区铜绿假单胞菌多药耐药的形成密切相关,其调控基因mexR发生突变是其高表达的原因之一。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2010-04-01）
任静朝,段广才,宋春花,吕锐利,张卫东[4]（2010）在《志贺菌主动外排泵acrAB-tolC及调控基因marOR突变与耐药的关系》一文中研究指出目的:研究志贺菌的耐药状况,检测临床分离志贺菌主动外排泵acrAB-tolC基因及调控基因marOR的突变情况,并探讨其与耐药性的关系。方法:对159株临床分离的志贺菌进行四环素、氯霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、诺氟沙星、复方新诺明6种药物的药敏试验和有机溶剂耐受试验,对其acrAB-tolC基因和marOR基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增,并进行限制性内切酶酶切与单链构象多态性(SSCP)分析。结果:159株临床分离的志贺菌属细菌筛选出4株敏感株、18株耐单药株和137株耐多药株,耐多药率为86.2%(137/159);159株中有122株对有机溶剂耐受,耐受率为76.7%(122/159);159株均扩增出acrAB-tolC基因和marOR基因,未发现基因缺失株;单链构象多态性分析,155株耐药菌株中,marOR基因的突变率为17.4%,acrA基因的突变率为5.8%,acrB基因的突变率为3.9%,tolC基因的突变率为2.6%;4株敏感株未发现marOR、acrA、acrB和tolC基因突变。结论:临床分离的志贺菌耐多药率和有机溶剂耐受率均较高,且存在较高的marOR基因突变率。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2010年01期）
张亚妮,杨亮,段康民[5]（2008）在《铜绿假单胞菌gshb基因突变对MexXY-OprM主动外排泵表达的影响》一文中研究指出目的:研究铜绿假单胞菌谷胱甘肽合成酶基因(gshb)突变体对MexXY-OprM外排泵表达的影响.方法:运用同源重组技术构建铜绿假单胞菌的谷胱甘肽合成酶基因(gshb)突变体,将连有MexXY-OprM外排泵启动子的pMS402质粒电转化到此突变体中,通过pMS402质粒上的Lux报道子发光值大小检测MexXY-OprM外排泵的表达变化情况.结果:MexXY-OprM外排泵的表达在谷胱甘肽合成酶突变体中显着降低.结论:铜绿假单胞菌中的谷胱甘肽对MexXY-OprM的表达具有促进作用,这将为进一步探讨MexXY-OprM的分子机制提供理论依据.(本文来源于《第四军医大学学报》期刊2008年23期）
胡英[6]（2003）在《霍乱弧菌对喹诺酮耐药性中,与靶基因突变相关的主动外排的作用》一文中研究指出喹诺酮是治疗由霍乱弧菌引起的霍乱的可选药物之一。最近 ,Ｂａｒａｎｗａｌ等研究证明除了靶基因ｇｙｒＡ和ｇａｒＣ上的突变外 ,临床分离霍乱弧菌属中 ,质子动力依赖型外排与喹诺酮的耐药性有关。ＭＩＣ显示不同菌株对氟喹诺酮的敏感性不同。基于ＭＩＣ ,菌株ＡＳ6(本文来源于《国外医药(抗生素分册)》期刊2003年01期）
突变主动外排论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
随着抗生素的应用,志贺菌耐药现象日益普遍,给细菌性痢疾的防治工作带来了一定困难。研究表明细菌的耐药机制涉及多个方面,其中主动外排泵可能起着较重要的作用。本课题组的前期研究已证实志贺菌中也存在AcrAB-Tolc主动外排泵及其调控基因marOR。在对acrAB-tolc泵基因的研究中,发现耐多药株的acrA mRNA水平明显高于敏感株,但acrAB-tolC基因突变株与未突变株中,其mRNA水平的差异无统计学意义；在对调控基因marOR的研究中发现,该基因第1376-1379位点有4个碱基的缺失存在于志贺菌耐多药菌株中而不存在于敏感株和参考株中,从而推测该基因突变可能引起外排泵表达水平增高,进而影响志贺菌的耐药性。目的在前期研究的基础上,本课题旨在研究志贺菌marOR、acrA、acrB和tolC基因的突变情况,调控基因marOR的突变对AcrAB-Tolc主动外排泵表达的影响及其与细菌耐药的关系。方法1.菌株鉴定：在LB平板上划线复苏志贺菌菌株并重新进行血清学及生化鉴定。2.药物敏感试验：采用Kinby-Bauer纸片琼脂扩散法,质控菌为ATCC25922。3.有机溶剂耐受试验：能够在正己烷与环己烷比例为3：1的混合溶液中生长的菌株视为有机溶剂耐受菌株。4.志贺菌marOR、acrA、acrB和tolC基因单链构象多态性(PCR-SSCP)分析：PCR扩增marOR、acrA、acrB和tolC基因,并进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,硝酸银染色,观察其单链构象多态性并照相。5.核酸序列分析：根据SSCP分析结果,选择11株突变株和1株敏感株、1株参考株进行marOR基因测序。6.志贺菌acrAB-tolC基因转录水平分析：利用TRIzol提取志贺菌的总RNA,按照逆转录试剂盒说明书进行第一链合成，PCR扩增目的片断,利用凝胶成像分析系统检测marOR突变组与未突变组中acrAB-tolC相对含量。7.志贺菌株4个碱基缺失的marOR基因克隆及4个碱基缺失联合3个点突变的marOR基因克隆：利用重迭延伸PCR扩增4个碱基缺失的marOR基因,与T载体连接后转入DH5a,得到4个碱基缺失的克隆株；4个碱基缺失联合3个点突变的克隆株是直接扩增具有该突变菌株的marOR基因然后与T载体连接后转入DH5a所得。最后进行核酸序列分析进行证实。8. marOR基因不同突变对细菌耐药性的影响：检测DH5a、转入T载体后的DH5a、完整marOR基因的DH5a克隆株、4个碱基缺失的DH5a克隆株及4个碱基缺失联合3个点突变的DH5a克隆株对多种抗生素的耐药性,并进行比较。结果1.志贺菌菌株耐药性检测：159株志贺菌临床分离株对TE、C、AM、GM、NOR和SMZ-TMP等6种药物的药敏试验结果,敏感株4株,耐单药株18株,耐多药株137株,耐多药率为86.2%。2.有机溶剂耐受试验：159株志贺菌中有122株对有机溶剂耐受,耐受率为76.7%。耐单药株的有机溶剂耐受率为83.3%,耐多药株的有机溶剂耐受率为75.9%。3.志贺菌marOR、acrA、acrB和tolC基因单链构象多态性(PCR-SSCP)分析：在159株志贺菌临床分离株中,4株敏感株未发现marOR、acrA、acrB和tolC基因突变；155株耐药株中,marOR基因的突变率为17.4%；acrA基因的突变率为5.8%；acrB基因的突变率为3.9%；tolC基因的突变率为2.6%。4.核酸序列分析：对参考株、敏感株(Z10)和11株marOR基因突变株的测序发现,与敏感株和参考株比较,8株突变株均存在1376-1379位点的4个碱基(CATT)缺失和3处点突变；另外3株耐药菌株中,菌株200011存在1381-1384位点的4个碱基(ATTT)缺失和包括以上3处点突变的多处点突变(与敏感株的匹配度仅有86%),菌株Z23存在5处点突变,菌株Z24存在2处点突变。5.志贺菌acrAB-tolC基因转录水平分析结果：凝胶成像分析表明,突变组acrA、acrB、tolC表达的相对含量明显高于未突变组acrA、acrB、tolC的相对含量,P<0.05,差异有统计学意义。6. marOR突变基因克隆：经过PCR扩增、基因克隆和核酸测序证实,已成功获得空载体克隆、无突变marOR基因、4个碱基缺失突变marOR基因及4个碱基缺失联合3个点突变marOR基因的克隆,分别记为DH5a(T)、DH5a(marOR)、DH5a(marOR-ACTT)、DH5a(marOR-ACTT+3m)。7. marOR突变对细菌耐药性的影响：按抑菌环直径相差5mm以上为抗生素耐药性有差别：与DH5a(T)比较,DH5a(marOR-ACTT)对链霉素、妥布霉素、先锋V、头孢氨苄的耐药性增加,DH5a(marOR-ACTT+3m)对链霉素和四环素的耐药性增加；与DH5a(marOR)比较,DH5a (marOR-ACTT)和DH5a(marOR-ACTT+3m)对链霉素、四环素、氯霉素、先锋V、左氟沙星、环丙沙星和氟哌酸的耐药性增加；DH5a(marOR-CATT)与DH5aT(marOR-CATT+3m)相比对除甲氧苄啶外的实验所用抗生素的抑菌环直径无明显差异。结论1.在志贺菌耐药菌株中,marOR基因的突变率较高。在检测的11株志贺菌耐多药菌株中,8株marOR基因第1376-1379处有4个碱基的缺失和3个点突变,而该缺失突变和点突变不存在于敏感株和参考株中。2. marOR基因突变的志贺菌的acrAB-tolC基因转录水平明显高于未突变菌株。3. marOR基因第1376-1379处的4个碱基缺失,使志贺菌对部分抗生素的耐药性增加。4. marOR基因第1411、1417、1435处的点突变对志贺菌的耐药性的影响较小。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
突变主动外排论文参考文献
[1].曲俊彦,吕晓菊.插入突变法探索鲍曼不动杆菌对替加环素非主动外排的其他耐药机制[C].第十二届全国化疗药理学术研讨会会议论文集.2014
[2].任静朝.志贺菌主动外排泵acrAB-tolC及调控基因marOR突变与耐药的关系[D].郑州大学.2010
[3].魏志华.多药耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM主动外排系统的耐药作用及其调控基因mexR的突变情况[D].安徽医科大学.2010
[4].任静朝,段广才,宋春花,吕锐利,张卫东.志贺菌主动外排泵acrAB-tolC及调控基因marOR突变与耐药的关系[J].吉林大学学报(医学版).2010
[5].张亚妮,杨亮,段康民.铜绿假单胞菌gshb基因突变对MexXY-OprM主动外排泵表达的影响[J].第四军医大学学报.2008
[6].胡英.霍乱弧菌对喹诺酮耐药性中,与靶基因突变相关的主动外排的作用[J].国外医药(抗生素分册).2003