论文摘要
针刺疗法，是通过穴位刺激，调动和促进人体自我愈合能力的一种自然疗法，是一种累积治疗模式，需要多次的重复。治疗一种疾病，随着疗程的增加，针刺的效应不断被巩固，并显示出了良好的治疗作用。研究结果表明：针刺的后效应不但有复杂的神经系统参与，还有神经-体液因素的作用。针刺的累积效应很可能是与中枢神经系统内有关脑区、核团，特别是与边缘系统（海马、下丘脑等）神经元的记忆、编码、解码过程、突触的可塑性、神经内分泌等功能活动的改变密不可分。我们实验室去年的工作表明：下丘脑-垂体-肾上腺皮质系统的β-内啡呔、促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质醇等参与重复针刺的镇痛效应。本文试图从神经记忆的角度，在慢性痛和记忆低下的复合动物模型上探讨针刺累积效应的机制，为临床治疗疾病提供实验依据。研究目的：探讨边缘系统海马及下丘脑在针刺累积效应中的作用及其分子生物学机制，为临床针刺治疗疾病提供实验依据。方法：实验采用雌性Wistar大鼠。1)电生理实验：在30只乌拉坦（420mg／kg）和氯醛糖（50mg／kg）混合液麻醉（i.p）的正常雌鼠上，用玻璃微电极记录海马CA1区细胞外电活动，观察电针（2Hz和100Hz，1mA）“足三里”-“阳陵泉”穴区对神经元电活动的影响。2)行为学实验：91只大鼠随机分为正常对照组、去卵巢+慢性压迫性损伤（OVX+CCI）组、OVX+CCI电针2天组（OVX+CCI EA2D）、OVX+CCI EA 2周组（OVX+CCI EA2W）、CCI组、CCI EA2D组、CCI EA2W组，每组13只。用现今较为公认的去卵巢降低雌激素而造成记忆损伤的动物模型；用Morris水迷宫法检测去卵巢后记忆的变化情况；用坐骨神经结扎造成CCI慢性痛模型，用辐射热照射动物足底引起缩腿反应潜伏期作为痛阈；并观察电针（2／15Hz，1mA，30min／次）“足三里”-“阳陵泉”穴区的作用。3)分子生物学实验：上述各组行为学实验完毕后，用RT-PCR方法获得大鼠海马与下丘脑胆碱乙酰转移酶（ChAT）mRNA和前阿黑皮素原（POMC）mRNA的逆转录表达产物-cDNA，用琼脂糖凝胶电泳方法检测，观察电针后海马、下丘脑ChAT mRNA、POMC mRNA表达，分析针刺累积效应的机制。结果：1．2Hz电针使海马CA1区神经元放电的变化表现出了三种类型的趋势，即兴奋型（5／31，16.13％）、抑制型（11／31，35.48％）、变化不明显型（15／31，48.39％），2Hz电针对海马CA1区神经元主要表现为抑制性作用。停针后2Hz电针对海马CA1区神经元放电兴奋或抑制的后效应依然存在。2．100Hz电针使海马CA1区神经元放电的变化表现出了三种类型的趋势，即兴奋型（5／31，16.13％）、抑制型（15／31，48.39％）、变化不明显型（11／31，35.48％），100Hz电针对海马CA1区神经元主要表现为抑制性作用。停针后100Hz电针对海马CA1区神经元放电兴奋或抑制的后效应依然存在，且与2Hz没有明显差异。3．去卵巢手术5周后，进行水迷宫实验，水迷宫实验第7日，记忆未损伤组逃避潜伏期（5.57±3.26秒）明显短于记忆损伤组（29.6810±8.34秒）（P＜0.01）。第8天撤掉目标象限的台子，大鼠在目标象限停留的时间百分比，OVX组（31.88±15.72％）明显短于未去卵巢组（44.16±12.99％）（P＜0.05）；在目标象限所游距离的百分比，OVX组（22.47±14.13％）明显短于未去卵巢组（33.60±15.62％）（P＜0.05）。4．在CCI术后，电针第14天时，辐射热痛阈结果显示：CCI模型对照组（7.76±0.18秒）低于正常对照组（11.65±0.37秒）（P＜0.05）；CCI EA2D组（7.86±0.26秒）与CCI模型对照组（7.76±0.18秒）之间没有统计学差异（P＞0.05）；CCI+EA2W组（11.58±0.28秒）高于CCI+EA2D组（7.86±0.26秒）（P＜0.05）。OVX+CCI模型对照组（7.43±0.49秒）低于正常对照组（11.65±0.37秒）（P＜0.05）；OVX+CCIEA2D组（7.47±0.33秒）与OVX+CCI模型对照组（7.43±0.49秒）之间没有统计学差异（P＞0.05）；OVX+CCI+EA2W组（8.40±0.84秒）高于OVX+CCI+EA2D组（7.47±0.33秒）（P＜0.05）；CCI+EA2W组（11.58±0.28秒）高于OVX+CCI+EA2W组（8.40±0.84秒）（P＜0.05）。5．下丘脑POMC mRNA的表达：CCI模型对照组（0.97±0.18）强于正常对照组（0.53±0.11）（P＜0.05）；CCI EA2D组（1.00±0.20）与CCI模型对照组（0.97±0.18）之间没有统计学差异（P＞0.05）；CCI+EA2W组（1.45±0.31）强于CCI+EA2D组（1.00±0.20）（P＜0.05）。OVX+CCI模型对照组（0.74±0.13）与正常对照组（0.53±0.11）之间没有统计学差异（P＞0.05）；OVX+CCI EA2D组（0.69±0.11）与OVX+CCI模型对照组（0.74±0.13）之间没有统计学差异（P＞0.05）；OVX+CCI+EA2W组（0.94±0.08）强于OVX+CCI+EA2D组（0.69±0.11）（P＜0.05）；CCI+EA2W组（1.45±0.31）强于OVX+CCI+EA2W组（0.94±0.08）（P＜0.05）。6．海马ChAT mRNA的表达：CCI模型对照组（0.88±0.18）与正常对照组（0.65±0.17）之间没有统计学差异（P＞0.05）；CCI EA2D组（0.89±0.17）与CCI模型对照组（0.88±0.18）之间没有统计学差异（P＞0.05）；CCI+EA2W组（1.47±0.34）强于CCI+EA2D组（0.89±0.17）（P＜0.05）。OVX+CCI模型对照组（0.70±0.18）与正常对照组（0.65±0.17）之间没有统计学差异（P＞0.05）；OVX+CCI EA2D组（0.75±0.17）与OVX+CCI模型对照组（0.70±0.18）之间没有统计学差异（P＞0.05）；OVX+CCI+EA2W组（0.96±0.10）与OVX+CCI+EA2D组（0.75±0.17）之间没有统计学差异（P＞0.05）；CCI+EA2W组（1.47±0.34）强于OVX+CCI+EA2W组（0.96±0.10）（P＜0.05）。7．下丘脑ChAT mRNA的表达：CCI模型对照组（0.94±0.09）与正常对照组（0.87±0.11）之间没有统计学差异（P＞0.05）；CCI EA2D组（1.01±0.13）与CCI模型对照组（0.94±0.09）之间没有统计学差异（P＞0.05）；CCI+EA2W组（1.46±0.23）强于CCI+EA2D组（1.01±0.13）（P＜0.05）。OVX+CCI模型对照组（0.65±0.27）弱于正常对照组（0.87±0.11）（P＜0.05）；OVX+CCI EA2D组（0.64±0.15）与OVX+CCI模型对照组（0.65±0.27）之间没有统计学差异（P＞0.05）；OVX+CCI+EA2W组（0.87±0.09）强于OVX+CCI+EA2D组（0.64±0.15）（P＜0.05）；CCI+EA2W组（1.46±0.23）强于OVX+CCI+EA2W组（0.87±0.09）（P＜0.05）。结论：1．电针“足三里”-“阳陵泉”穴区的信息可到达海马CA1区，并能显著影响多数神经元的电活动；2．2次电针不能明显提高CCI大鼠痛阈，2周电针能明显提高痛阈。记忆损伤后，电针的效应受到明显削弱。3．2周电针可明显强化下丘脑POMC mRNA、下丘脑及海马ChAT mRNA的表达，2次电针作用不明显。记忆损伤后电针的作用减弱。因此，电针“足三里”-“阳陵泉”穴区减轻慢性痛有显著的累积效应，并与神经记忆功能关联；其作用与针刺上调下丘脑POMC mRNA、下丘脑及海马ChAT mRNA的表达密切相关。