论文摘要
目的:肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是恶性程度很高的恶性肿瘤,是临床工作中常见恶性肿瘤中发病率较高的一种。全球范围内,发病率在所有新发肿瘤中位居第六位,每年因肿瘤死亡病例数中位居第三位。而且绝大多数新发病例及死亡病例位于中国大陆、东南亚及撒哈拉沙漠以南非洲地区,肝细胞癌已成为这些地区的主要公共健康问题。目前在中国大陆肝细胞癌在所有因肿瘤死亡病例中位居第二位,死亡率为:26.26/100000（男:37.55/100000,女:14.45/100000）。估计每年新发肝细胞癌病例数及死亡病例数分别为:360000例及350000例。因此深入研究肝癌的发生和发展的机制,探讨有效的防治途径是目前国内外肝癌研究的热点。过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs）是核激素受体超家族中的重要成员,是一类配体依赖的核转录因子,与脂肪的存储、分化及代谢等生理过程有密切关系。目前研究确认的PPARs有三种亚型（即PPAR-α、PPAR-γ及PPAR-δ）,其中PPAR-γ是目前研究最广泛的一种。近年来国内外研究发现在多种恶性肿瘤组织中均有PPAR-γ的表达上调,与恶性肿瘤的发生、发展及转化关系密切。丝裂原活化蛋白激酶（Pitogen-activated protein kinase, MAPKs）信号通路在许多恶性肿瘤的生长、分化、凋亡中扮演了重要作用。生物进化的高度保守性是MAPKs信号传导通路的主要特征,细胞信号通过MAPKS信号通路中的三级激酶级联（MAPKKK- MAPKK-MAPK）形式传导,通过激活下游转录因子,将细胞外部多种刺激信号传递至细胞核内的信号通路,其与细胞的增殖、分化、转化、炎症以及凋亡等多种生物学事件以及机体的多种生理病理过程相关。MAPKs是调控细胞生长与凋亡过程的重要信号传导途径,它包括P38MAPK通路、JNK/SAPK通路、ERK5 /BMK1通路和ERK通路等主要亚型。P38MAPK信号通路受细胞外信号的刺激而激活,磷酸化下游转录因子及作用于细胞周期,参与细胞的增殖、分化和凋亡。国外研究证实PPARs的活化与MAPKs信号通路具有密切关系。转录因子激活蛋白-1（activating protein-1, AP-1）是有两部分转录因子组成的蛋白家族,通过亮氨酸拉链相结合并与DNA绑定,JUN（c-Jun, JunB and JunD）和Fos （c-Fos, FosB, Fra1 and Fra2）是AP-1主要组成部分,在哺乳动物主要为c-fos和c-jun。研究表明:AP-1是重要的调节蛋白,在细胞的生长、分化、转化和凋亡过程中起重要作用,是调节细胞增殖和生存的中枢。AP-1因子在恶性肿瘤过程中扮演着重要角色,通常增加AP-1的表达水平能够增强靶基因的转录活性,调节AP-1的活性能在不同的水平影响细胞的命运和发生,包括:二聚物组成、转录和转录后事件及辅助蛋白相互作用。最近发现AP-1在微环境缺氧的条件下能够促使肿瘤血管的生成而引起肿瘤的生长。本实验采用免疫组织化学方法联合检测肝细胞癌组织及正常肝组织中PPAR-γ、P38和AP-1（c-fos及c-jun）蛋白的表达,分析其与肝细胞癌临床病理特征的关系及相互关系,并结合随访资料初步探讨它们在肝细胞癌中表达的意义及其预后价值。方法:采用河北医科大学第四医院肝胆外科2005-2008年手术切除并经病理证实的、随访资料完整的原发性肝癌标本57例,标本经病理组织学证实均为肝细胞癌。所有患者术前均未经过任何抗肿瘤治疗。20例正常肝组织标本取自肝血管瘤手术组织。标本切除离体立即固定于10%中性甲醛溶液,石蜡包埋。由两位有经验病理医师进行病理组织学诊断。免疫组织化学方法检测57例肝细胞癌组织及20例正常肝组织中PPAR-γ、P38及AP-1（c-fos及c-jun）蛋白的表达,分析其与肝癌临床病理特征的关系及相互关系,并结合随访资料探讨它们在肝细胞癌中表达的意义及预后价值。本研究随访时间1.071.13个月,中位随访时间为26.1个月。结果:1 PPAR-γ蛋白在肝细胞癌组织中的表达及与临床病理特征的关系在肝细胞癌组织中,PPAR-γ蛋白的表达率为45.6%,显著高于正常肝组织中的表达（P<0.05）。PPAR-γ蛋白在肿瘤直径>5cm组（56.7%）、门静脉癌栓组（85.7%）的阳性表达率显著增高（P<0.05）;PPAR-γ蛋白的阳性表达率与TNM分期有关,分期越晚阳性率越高（P<0.05）。PPAR-γ蛋白表达与预后无关（χ2=0.009,P=0.757）。2 P38蛋白在肝细胞癌组织中的表达及与临床病理特征的关系用免疫组织化学法检测肝细胞癌组织显示,P38蛋白的阳性高表达率为64.9%,表达水平有明显升高（P<0.05）。P38蛋白在肿瘤直径>5cm组、单发肿瘤组和肿瘤直径≤5cm组、多发肿瘤组中阳性表达情况分别为:63.3%、66.0%和66.7%、60.0%,统计学分析显示均无显著差异（P>0.05）;P38在伴有门静脉癌栓（87.5%）与无门静脉癌栓（62.0%）的肝细胞癌组织中表达率无显著差异（P=0.419）;P38蛋白的阳性表达率与TNM分期无关（P=1.00）。P38蛋白表达与患者预后无关（χ2=1.566,P=0.211）。3 AP-1（c-fos及c-jun）蛋白在肝细胞癌组织中的表达及与临床病理特征的关系免疫组织化学检测肝细胞癌组织发现,c-fos蛋白的表达率为71.9%,显著高于正常肝组织中的表达（P<0.01）;c-jun蛋白的表达率为77.2%,显著高于正常肝组织中的表达（P<0.01）;c-fos蛋白在肿瘤直径>5cm组、门静脉癌栓组中的高表达率分别为:66.7%、85.7%,在肿瘤直径≤5cm组、无门静脉癌栓组中的高表达率分别为:77.8%、70.0%,统计学分析无显著差异（P>0.05）,且与肿瘤的个数、有无转移及TNM分期无关（P>0.05）;c-jun蛋白在肿瘤直径>5cm组、门静脉癌栓组中的高表达率分别为:77.8%、85.7%,在肿瘤直径≤5cm组、无门静脉癌栓组中的高表达率分别为:76.7%%、76.0%,统计学分析无显著差异（P>0.05）,且与肿瘤的个数、有无转移及TNM分期无关（P>0.05）;c-fos及c-jun与肝细胞癌的生存期无关（χ2=0.125,P=0.724及χ2=0.284,P=0.594）。4 PPARγ和P38、AP-1（c-fos及c-jun）蛋白在肝细胞癌组织中的表达相关性分析统计学相关分析显示:在肝细胞癌组织中,PPAR-γ蛋白与P38蛋白表达正相关（r=0.378,P=0.004）;P38蛋白与c-fos蛋白表达正相关（r=0.359, P=0.006）;P38蛋白与c-jun蛋白表达正相关（r=0.301,P=0.023）;c-fos蛋白与c-jun蛋白的表达呈显著正相关（r=0.498,P=0.000）。结论:1 PPAR-γ、P38、c-fos及c-jun蛋白在肝细胞癌组织中的表达水平明显高于正常肝组织。2 PPAR-γ蛋白的表达水平与肝细胞癌的肿瘤直径、门静脉癌栓、TNM分期等生物学行为密切相关。P38、AP-1（c-fos及c-jun）蛋白表达水平与肝癌的肿瘤直径、门静脉癌栓、TNM分期等生物学行为无相关性。PPAR-γ、P38、AP-1（c-fos及c-jun）在肝细胞癌中的蛋白表达水平与生存期无相关性。3 PPAR-γ蛋白与P38蛋白表达有正相关性; P38蛋白与c-fos蛋白表达有正相关性;P38蛋白与c-jun蛋白表达有正相关性;c-fos蛋白与c-jun蛋白的表达呈显著正相关。PPAR-γ和P38、c-fos、c-jun在肝细胞癌的发生、发展及转化过程中发挥作用,它们之间的相互关系有待进一步研究证实。