胃癌细胞系幽门螺杆菌感染对HIF-1α、HIF-2α及VEGF表达的影响

论文摘要

研究背景及目的：胃癌（gastric cancer）是常见的恶性肿瘤，也是肿瘤常见死因。目前，外科手术与抗肿瘤治疗并未改善胃腺癌的不良预后。幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，H.pylori）已经被确认为胃癌的重要病因之一，与胃癌的不良预后相关。幽门螺杆菌阳性的胃癌易发生侵袭和转移。血管内皮生长因子（Vascu1αr endothelial growthfactor，VEGF）是诱导恶性肿瘤新生血管生成的主要的调控因子之一。缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）、缺氧诱导因子-2α（hypoxia inducible factor-2α，HIF-2α）在诱导恶性肿瘤新生血管生成中起着至关重要的作用。研究胃癌侵袭和转移的可能机制，有助于寻找抗肿瘤侵袭和转移的新途径，进一步改善胃癌预后。本文通过研究幽门螺杆菌对人胃癌细胞株BGC-823中HIF-1α、HIF-2α、VEGF表达的影响。以探讨幽门螺杆菌感染对胃癌侵袭转移能力的影响及可能诱导胃癌血管生成机制。方法：将不同浓度的H.pylori悬液（l×103cfu／ml、l×104cfu／ml、l×105cfu／ml、l×106cfu／ml和l×107cfu／ml）与BGC-823细胞共培养，对照组加稀释用培养液。共培养12h、24h、36h、48h后，收集细胞，应用MTT法检测细胞存活率。取低浓度（l×103cfu／ml、l×104cfu／ml、l×105cfu／ml）的H.pylori悬液与BGC-823细胞共培养24h后收集细胞，分别应用RT-PCR和Western blot技术检测HIF-1α、HIF-2α及VEGF的表达。对照组加稀释用培养液。结果：低浓度的H.pylori悬液（l×103cfu／ml、l×104cfu／ml、l×105cfu／ml）与BGC-823细胞共培养12h、24h、36h、48h后，实验组细胞存活率较对照组显著增高，差异均有统计学意义（P<0.05）。高浓度的H.pylori悬液（l×106cfu／ml、l×107cfu／ml）与BGC-823细胞共培养12h、24h、36、48h后。实验组细胞存活率较对照组显著降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较，低浓度的H.pylori可显著提高BGC-823细胞中HIF-1α、HIF-2α及VEGF mRNA和蛋白的表达，差异均有统计学意义（P<0．05），且呈浓度依赖性。结论：一定浓度的H.pylori能够刺激BGC-823细胞VEGF的表达,其机制可能是通过HIF-1α、HIF-2α途径介导的。这可能是其诱导胃癌血管生成和促进胃癌侵袭转移的机制之一。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 研究对象
• 1.2 试剂与器材
• 1.2.1 主要试剂
• 1.2.2 主要仪器
• 1.3 方法
• 1.3.1 BGC-823 细胞的培养
• 1.3.2 BGC-823 细胞的传代
• 1.3.3 BGC-823 细胞的冻存
• 1.3.4 BGC-823 细胞的复苏
• 1.3.5 H.pylori 菌的培养
• 1.3.6 H.pylori 菌的传代
• 1.3.7 H.pylori 菌的冻存
• 1.3.8 H.pylori 菌的复苏
• 1.4 H.pylori 悬液的制备
• 1.5 H.pylori 悬液和 BGC-823 细胞共培养
• 1.6 MTT 法检测细胞存活率
• 1.7 RT-PCR 检测 HIF-1α，HIF-2α和 VEGF mRNA 的表达
• 1.7.1 总 RNA 抽提
• 1.7.2 RNA 样品定量
• 1.7.3 琼脂糖凝胶电泳鉴定 RNA 质量
• 1.7.4 PT-PCR
• 1.7.5 琼脂糖凝胶电泳
• 1.8 Western blot 检测 HIF-1α，HIF-2α和 VEGF 蛋白表达
• 1.8.1 蛋白样品制备
• 1.8.2 蛋白含量的测定
• 1.8.3 SDS－PAGE 电泳
• 1.8.4 转膜
• 1.8.5 免疫反应
• 1.8.6 化学发光，显影，定影
• 1.8.7 凝胶图象分析
• 2 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 MTT 法检测细胞存活率
• 3.2 BGC-823 细胞 HIF-1α、HIF-2α及 VEGF mRNA 的表达
• 3.3 BGC-823 细胞 HIF-1α、HIF-2α及 VEGF 蛋白的表达
• 4 附图、表
• 5 讨论
• 6 结论
• 参考文献
• 综述
• 综述参考文献
• 在学研究成果
• 致谢