灰飞虱与RSV亲和性相关的分子标记及RSV对灰飞虱生活力的影响

论文摘要

水稻条纹病毒（Rice stripe virus,RSV）是纤细病毒属（Tenuivirus）的典型成员,由介体灰飞虱（Laodelphax striatellus Fallén,SBPH）以持久性方式经卵传播。本文通过构建亲和力差异明显的两个灰飞虱群体—高亲和性灰飞虱群体和非亲和性灰飞虱群体,运用随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD）与单引物扩增PCR（single primer amplified reactions,SPAR）两种分子生物学技术,分析两个灰飞虱群体的基因差异,初步研究了灰飞虱与RSV亲和性相关的分子标记。并且对高亲和性灰飞虱群体的无毒虫与带毒虫进行不同组合的杂交配对,探索其对F1代生活力的影响。从江苏四个地区采集灰飞虱,通过连续多代的人工筛选,获得了对RSV亲和性差异显著的两个灰飞虱群体。高亲和性的群体在经过4代无人工选择压力后仍可保持90%以上的带毒率。说明构建的高亲和性群体不仅具有很高的带毒率而且具有较好的稳定传递特性,这样一个群体对于传毒机制的研究、RSV致病性分化研究和品种抗性分析都具有重要意义。运用RAPD和sPAR技术筛选高亲和性灰飞虱群体和非亲和性灰飞虱群体的差异基因序列,结果表明在47条随机引物中筛选出3条,在3条微卫星引物中筛选出2条能扩增出多态性较好的条带,其中3条随机引物和2条微卫星引物各有一条能扩增出差异条带,扩增效果也比较单一。他们对高亲和性灰飞虱群体均分别能扩增出一条1 200bp和一条900bp特异性条带。推测这两条特异性条带可能可以作为灰飞虱与RSV亲和性相关的分子标记。利用同一家系的高亲和性灰飞虱的无毒虫与带毒虫,将亲代灰飞虱组合成四个组合:组合1带毒雌虫×带毒雄虫;组合2带毒雌虫×无毒雄虫;组合3无毒雌虫×带毒雄虫;组合4无毒雌虫×无毒雄虫作为对照。研究发现F1代的带毒情况只与雌虫有关,雌虫带毒则后代带毒率为100%。携带RSV灰飞虱,其对F1带产卵量无明显影响,而对孵化力有影响,四个组合中孵化出的一龄幼虫数,组合4＞组合2＞组合1与组合3,组合1与3间无显著差异,从中可以看出,带毒亲代灰飞虱其后代的孵化力减弱,且带毒雄虫对孵化力似乎影响更大一些。同时研究显示,携带RSV的灰飞虱,其孵化历期延长,并且F1代幼虫和成虫成活率相对无毒虫组合有所提高。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 文献综述
• 1 水稻条纹叶枯病的研究进展
• 1.1 水稻条纹病毒的概况
• 1.2 RSV的传播介体
• 1.3 病毒对介体昆虫的影响
• 1.4 介体昆虫遗传差异的研究
• 2 植物病毒及其介体的互作机制
• 2.1 非循回型传播
• 2.2 循回型传播
• 3 分子遗传标记及其在昆虫学研究中的应用
• 3.1 常用的分子标记技术
• 3.2 分子标记在昆虫科学中的应用
• 3.3 本研究所用的两种分子标记方法
• 4 本研究的目的和意义
• 第一章 灰飞虱与水稻条纹病毒亲和性相关的分子标记
• 1 材料与方法
• 1.1 毒源
• 1.2 供试的水稻品种
• 1.3 灰飞虱群体的筛选
• 1.4 试剂及仪器
• 1.5 引物
• 1.6 试验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 不同亲和性灰飞虱群体筛选结果
• 2.2 灰飞虱总DNA提取的结果
• 2.3 RAPD分析
• 2.4 SPAR分析
• 3 结论与讨论
• 3.1 高亲和性灰飞虱群体与非亲和性灰飞虱群体的建立
• 3.2 与亲和性相关的分子标记
• 1代生活力的影响'>第二章 水稻条纹病毒对灰飞虱及其F₁代生活力的影响
• 1. 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 研究方法
• 2 结果与分析
• 1代带毒率的影响'>2.1 亲代带毒灰飞虱对F₁代带毒率的影响
• 2.2 带毒灰飞虱对当代产卵的影响
• 1代孵化的影响'>2.3 亲代带毒灰飞虱对F₁代孵化的影响
• 1代羽化的影响'>2.4 亲代带毒灰飞虱对F₁代羽化的影响
• 3 结论与讨论
• 全文总结
• 1 结论
• 2 有待进一步研究和完善的问题
• 参考文献
• 硕士期间发表及待发表论文
• 致谢