论文摘要
中药的疗效是其所含多种成分协同、互补或制约的综合作用的结果,而目前对中药的质量评价,仅以一种或几种化学成分的定性或定量测定作为质控标准,显然不能达到控制中药质量的目的。中药指纹图谱是中国国家药品监督管理局（SFDA）进行中药材鉴定和成药质量控制的推荐技术之一,自2000年国家药品监督管理局颁布《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》以来,中药指纹图谱的研究已成为我国中药研究和产业界的热点。而目前的指纹图谱仅仅局限在“化学成分群”的分析,没有以药效作为指纹性的依据,所得的图谱并不能如实体现中药的质量和疗效。如何将中药指纹图谱中化学成分的变化和中药药效结果联系起来,研究他们的相关关系,建立与中药药效基本一致的,能反映中药内在质量的质量评价体系,这正是本论文要研究和解决的问题。本论文以芸香科植物两面针Zanthoxylum nitidum（Roxb.）DC.为研究对象,以HeLa、HepG-2两种肿瘤细胞为药效模型,构建两面针的指纹图谱。在获得抗肿瘤活性测定的结果和建立化学成分指纹图谱的基础上,采用多元线性回归法,寻找两面针“化学谱”-“药效”之间的对应关系。本论文的研究包括:方法:（1）两面针抗肿瘤活性部位的筛选采用回流法,分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水等4种溶剂对两面针药材进行提取,得到不同溶剂部位提取物;采用MTT法,以人宫颈癌细胞株HeLa和人肝癌细胞HepG-2为模型,对不同溶剂部位提取物进行活性成分筛选;进行HPLC考察,观察不同部位成分、含量的差异;根据MTT法和HPLC图谱确定两面针药材中抗肿瘤的活性部位,制备43个产地的两面针提取物。（2）建立两面针HPLC化学指纹图谱根据化学指纹图谱研究的要求,运用国家药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件,建立并评价两面针抗肿瘤活性部位的HPLC指纹图谱。（3）各产地两面针抗肿瘤活性测定采用MTT法,以人宫颈癌细胞株HeLa和人肝癌细胞HepG-2为模型,对43个产地的两面针提取物进行抗肿瘤活性测定。（4）构建两面针谱-效关系模型采用多元线性回归法,将量化特征峰面积与MTT法测得两面针药材抗肿瘤活性的结果结合,构建两面针抗肿瘤“化学谱”-“药效”关系。结果:（1）氯仿提取部位为两面针药材抗肿瘤的活性部位,该部位含有氯化两面针碱、鹅掌楸碱、白屈菜红碱、乙氧基白屈菜红碱等具有抗肿瘤作用的生物碱类成分。（2）建立的两面针药材HPLC指纹图谱相似度达到0.7,经相似度软件筛选出24个指纹峰,包括已知具有抗肿瘤活性的氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱、左旋芝麻素等成分。（3）各产地两面针的抗肿瘤活性存在差异,抗肿瘤作用较强的产地为广西那坡县、大塘镇、广西大新县、广西融水县、广西扶绥县。说明这几个产地两面针药材的抗宫颈癌、肝癌效果比较好,品质比较高。（4）经直线回归处理,HPLC指纹图谱中的24个指纹峰中,有17个峰对HeLa细胞有作用, HeLa的谱-效关系式为:Y=28.071+18.451X1-13.693X2 -4.670X4+9.028X6+6.292X7-1.817X8-3.428X11+10.852X14-5.395X15+6.936X17 +9.263X18+8.904X19+4.567X20-9.226X21-8.954X22+3.619X23-5.357X24 （R2=0.957）;有17个峰对HepG-2细胞有作用,HepG-2的谱-效关系式为:Y=70.255-16.695X1-2.756X3+11.519X5+3.107X6-4.491X7-1.737X8-1.052X9 +13.224X10-11.944X11-9.035X12-25.106X15+9.911X16+10.796X17+10.489X18 +3.432X20-12.643X21+6.152X23 （R2=0.977）。经10批药材验证,谱-效关系式计算值与实际值的偏差率不超过10%,表明谱-效关系可用于预测两面针的抗宫颈癌、肝癌作用。结论:（1）不同产地的两面针药材中的化学成分的含量存在差异,直接导致其药效的差异。因此,不能测定单一或者几个化学成分的含量来进行两面针药材的质量控制。（2）通过对药效部位的HPLC指纹图谱分析,较好的体现出两面针中氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱等活性成分及其他成分在含量上的差异,可用于两面针的质量控制。（3）本研究所建立的两面针抗宫颈癌、抗肝癌谱-效关系方程很好的反映出两面针药材的内在品质和疗效,以中药生物活性指纹图谱控制中药的质量更为科学合理。
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