论文摘要
本论文分为两部分：第一部分文献综述中药抗流感病毒研究进展，综述了近几年来国内外中药及植物药在抗流感病毒方面的研究进展情况。对狗脊属植物的化学成分及药理活性研究进展进行了综述。第二部分实验研究1.单芽狗脊有效部位的提取纯化工艺：采用L9（ 34 ）正交实验，以总黄酮含量为指标，考察了乙醇浓度、提取次数、提取时间和溶媒用量，对单芽狗脊的提取工艺进行优化，确定最佳工艺条件为：A2浓度的乙醇提取2次，每次2h，溶媒用10倍量。通过测定分析六种大孔吸附树脂对总黄酮的吸附特性，综合考虑多方面因素，通过A、D两种树脂富集有效部位。通过考察A、D两种树脂对总黄酮的吸附特性：上样液浓度、上样量、吸附流速、径高比、除杂溶剂、除杂溶剂用量、除杂流速、洗脱溶剂、洗脱流速、洗脱体积等影响因素，确定了最佳树脂纯化工艺。三批样品的制备和含量测定验证结果表明该工艺合理、稳定。总黄酮含量约64%以上，总黄酮转移率约51%以上，出膏率约1.27%，RSD为1.28%。2.对照品的制备：用大孔吸附树脂、硅胶柱色谱法、聚酰胺色谱柱和反相C-18柱色谱法，从单芽狗脊中分离得到山柰素-3-O--L-（4-O-乙酰基）鼠李糖基-7-O--L-鼠李糖苷（利用波谱法和化学法鉴定了该单体的结构）对照品45mg（经HPLC纯度测定，达到99.2%）。3.建立了高效液相色谱法测定单芽狗脊有效部位中山柰素-3-O--L-（4-O乙酰基）鼠李糖基-7-O--L-鼠李糖苷的含量测定方法。对照品山柰素-3-O--L-（4-O-乙酰基）鼠李糖基-7-O--L-鼠李糖苷在0.1596 - 0.7980μg范围内时，其色谱峰峰面积与进样量呈良好的线性关系，回归方程为：A= 58464x + 34.5，r=0.9999，对照品回收率为101.62 %，RSD =1.52 %（n = 6）。对三批单芽狗脊有效部位进行了含量测定，三批有效部位中山柰素-3-O--L-（4-O-乙酰基）鼠李糖基-7-O--L-鼠李糖苷的平均含量为17.69 %，RSD = 1.50 %（n = 3）。实验结果表明，该方法简便、准确、可靠。4.建立了高效液相色谱法测定单芽狗脊有效部位中总黄酮含量测定的方法。以山柰素为对照品，有效部位水解后用HPLC法测定黄酮苷元-山柰素的量，在通过转化因子换算成黄酮苷的量。山柰素在0.074～0.89μg范围内其色谱峰峰面积与进样量呈良好的线性关系，回归方程为：y = 3882x - 4.364，r = 1，对照品回收率为98.66 %，RSD =1.17 %（n = 6）。对三批单芽狗脊药材、有效部位及进行了含量测定，三批单芽狗脊药材的平均总黄酮含量为1.40 %，有效部位的平均总黄酮含量为64.77 %。实验结果表明，该方法简便、准确、可靠。5.建立了单芽狗脊有效部位的HPLC指纹图谱检测方法，以山柰素-3-O--L-（4-O-乙酰基）鼠李糖基-7-O--L-鼠李糖苷为参照物，对自制的三批单芽狗脊有效部位进行了HPLC指纹图谱研究，建立了测定方法和指纹图谱相应的技术参数，标定了12个共有指纹峰，并通过与对照品对照确认了其中的2个共有指纹峰。精密度试验考察结果表明：各共有指纹峰相对保留时间的RSD在0.20-1.93 %之间，峰面积比值的RSD在2.42-3.46 %之间；稳定性实验结果表明：供试品溶液在24h内稳定；重复性实验结果表明：各共有指纹峰相对保留时间的RSD在0.23-2.13%之间，峰面积比值的RSD在2.19-3.48%之间。三批有效部位中非共有峰占总峰面积的百分比均未超过5 %。