论文摘要
近些年来研究发现Wnt/β-catenin在多种实体肿瘤及血液肿瘤中存在异常激活状态并在肿瘤的发生、维持等方面起着一些重要的作用;β-catenin的异常积累增高是其中的关键环节。慢粒急变中,β-catenin水平增高是粒巨祖细胞（GMP）发生白血病干细胞（LSC）转化的重要机制。在慢粒由慢性期进展为加速/急变期的过程中,常发现β-catenin表达水平增高。然而目前β-catenin在慢粒疾病进展中的确切作用尚未阐明。基于这些研究背景,本论文设计在先前的工作基础上,以β-catenin为靶点,特异性上调或下调β-catenin表达水平后,观察CML细胞生物学功能的改变,以期为进一步研究揭示慢粒急变机制提供一些线索,同时也为慢粒进展期的治疗寻找一些可能途径。本论文实验工作分为两部分:一、延续本实验室前期的体外研究工作,特异性干扰β-catenin后,观察K562细胞体内成瘤能力的变化。裸鼠皮下成瘤实验证实干扰后K562细胞成瘤能力明显受抑:①成瘤率:未干扰组（n=9）、对照组（无关序列干扰）（n=8）和干扰组（β-catenin特异性干扰）（n=9）成瘤率分别为100%、87.5%和0,干扰组成瘤率与前两组有显著的统计学差异（P＜0.001）;②成瘤曲线:前两组均成瘤,最终瘤块体积无统计学差异,但未干扰组瘤块体积增长略快;干扰组未见成瘤。二、上调/下调β-catenin水平,观察对原代CML干祖细胞（CD34+细胞）细胞生物功能的影响。①采用Nucleofection方法转染原代CML干祖细胞,转染率可达70%。用功能质粒转染慢性期干祖细胞,β-catenin表达水平增高倍数为6.10±2.99（Range:3.52～12.19）（与转染前比较,P=0.005）。用干扰质粒转染急变期干祖细胞,β-catenin表达水平下降倍数为8.79±3.05（Range:5.77～13.29）（与转染前比较,P=0.043）。②β-catenin功能质粒转染CML-CP干祖细胞后,细胞生长、增殖能力较对照组增加。③β-catenin干扰质粒转染CML-BC干祖细胞后,细胞生长、增殖能力受抑。④CP、BC干祖细胞干扰前后,BCR-ABL转录本水平无明显变化。综合以上实验工作,初步认为:①特异性干扰下调β-catenin的表达,影响K562细胞体外生长增殖能力,抑制其体内成瘤。②Nucleofection功能序列或特异性干扰片断是上调或下调原代CML干祖细胞β-catenin表达水平的有效方法。③CML-CP干祖细胞β-catenin表达水平上调,能增强其体外生长、增殖能力。④CML-BC干祖细胞β-catenin表达水平下调,则抑制其体外生长、增殖能力。⑤β-catenin对原代CML干祖细胞的体内作用如何,有待进一步研究。结果提示,β-catenin在CML疾病进展过程中可能起着重要作用,而不是简单的伴随现象;针对β-catenin的靶向研究有可能为阐明CML急变机制以及CML的根治提供一些新的思路。