苯扎贝特对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及LOX-1在其中的作用

论文摘要

目的:体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,用氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）干预后内皮细胞受损,观察其对内皮细胞凋亡及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）表达的影响,研究过氧化物酶增生物激活受体α（PPARα）的配体苯扎贝特对ox-LDL作用后的内皮细胞凋亡的影响并探讨其机制。方法:无菌培养人脐静脉内皮细胞,采用形态学及抗Ⅷ因子抗体免疫荧光染色进行内皮细胞鉴定。选择生长良好的第4、5代细胞用于实验。实验分为6组:①对照组:DMEM培养基;②ox-LDL组:培养基中加入终浓度为50mg/L的ox-LDL孵育24h;③低浓度苯扎贝特组:培养基中加入浓度为50umol/L的苯扎贝特预处理2h后,再加入ox-LDL（终末浓度50mg/L）共同孵育24h;④中浓度苯扎贝特组:苯扎贝特浓度为100umol/L,余同低浓度苯扎贝特组;⑤高浓度苯扎贝特组:苯扎贝特浓度为200μmol/L,余同低浓度苯扎贝特组。⑥多聚肌苷酸250μg/mL+中浓度苯扎贝特组:用250μg/mL多聚肌苷酸预处理2小时,余同中浓度苯扎贝特组。应用RT-PCR和Wester-blot方法分别测定各组LOX-1基因和蛋白的表达;应用流式细胞仪从数量上检测细胞凋亡状况;用RT-PCR和Wester-blot方法分别测①-⑤组凋亡基因Bcl-2、Bax的表达;结果:（1）正常细胞生长良好,倒置显微镜下观察可见其呈铺路石状镶嵌排列,细胞为扁平多角形,边界清楚,胞浆丰富。人第Ⅷ因子相关抗原的SP免疫组化细胞浆内染有棕黄色的染色颗粒为阳性反应,证实培养的细胞为内皮细胞。（2）正常对照组LOX-1（mRNA: 0.17±0.10,蛋白:0.22±0.10）表达较低,用50mg/L ox-LDL干预后LOX-1基因（0.90±0.15）和蛋白（0.91±0.06）表达较对照组明显增加,有统计学意义（P<0.01）;用不同浓度的苯扎贝特干预后LOX-1基因和蛋白表达较ox-LDL组明显下降（mRNA分别为:0.56±0.08,0.37±0.15,0.25±0.14蛋白分别为:0.57±0.26,0.38±0.18,0.27±0.04）有统计学意义,各组间比较亦有统计学意义（P<0.05）。多聚肌苷酸250μg/mL+中浓度苯扎贝特组LOX-1表达（mRNA: 0.27±0.13,蛋白:0.26±0.22）较中浓度苯扎贝特组进一步减少（P<0.05）。（3）ox-LDL组与正常对照组比较内皮细胞早期凋亡率及晚期凋亡率均明显增加（P<0.05）,抗凋亡基因Bcl-2表达下降（P<0.05）,凋亡基因Bax表达增加（P<0.05）,使Bcl-2和Bax的比值下降（P<0.05）,苯扎贝特可干预ox-LDL对内皮细胞的作用,使HUVECs早期凋亡率及晚期凋亡率均明显减少（P<0.05）,Bcl-2表达增加（P<0.05）,Bax表达降低（P<0.05）,Bcl-2/Bax上调（P<0.05）,且其作用成浓度效应依赖关系。预先用LOX-1阻滞剂干预后细胞早期及晚期凋亡率较中浓度苯扎贝特组比较进一步减少（P<0.05）,但较高浓度组苯扎贝特组比较无明显差别（P>0.05）。结论:（1）ox-LDL可引起内皮细胞LOX-1表达增加,起到损伤内皮细胞的作用。（2）苯扎贝特可以通过下调LOX-1 mRNA和蛋白的表达改善ox-LDL对内皮细胞的损。（3）ox-LDL可引起内皮细胞凋亡增加,上调抗凋亡基因Bcl-2表达,下降凋亡基因Bax表达,使Bcl-2和Bax的比值下降,苯扎贝特可改善ox-LDL对内皮细胞的损伤,通过上调Bcl-2与Bax的比值而减少HUVECs凋亡,从而起到抗动脉粥样硬化作用,部分机制可能通过LOX-1介导,为苯扎贝特调脂外的抗动脉粥样硬化作用提供了实验依据。

论文目录

中文摘要

英文摘要

正文

绪言

第一部分苯扎贝特对ox-LDL 所诱导内皮细胞LOX-1 表达的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

5 参考文献

第二部分苯扎贝特对ox-LDL 所诱导内皮细胞凋亡的影响及其机制