论文摘要
猪链球菌（Streptococcus suis, SS）是引起猪链球菌病的一种严重危害养猪业的细菌性传染病。根据其荚膜多糖成分的不同,将猪链球菌分为33个血清型（1～31、33型和1/2型）。血清2型是其中最常见、毒力最强的血清型。猪链球菌2型是一种人兽共患传染病病源,不仅影响养猪业的健康发展,而且对人类的健康造成危害。近来,对各种致病菌毒力蛋白和免疫保护性抗原的研究中,分泌蛋白和膜表面蛋白成为重点关注对象。目前研究较多的是SS2的分选酶催化反应锚定在细胞壁上的锚定蛋白,几乎所有的革兰氏阳性菌中都存在类似的蛋白锚定机制。这些被分选酶催化的锚定蛋白在C末端都含有LPXTG基序,其中X为任意氨基酸残基。据报道,SS2菌株中的SntA蛋白为膜表面蛋白,在C端有LPXTG基序,而且还含有三肽RGD基序,能与哺乳类动物细胞的整合素结合,而整合素是一种异质二聚体膜蛋白质,参与细胞与细胞黏附、细胞变异、迁移和连接到细胞外基质,SntA蛋白可能直接与整合素结合,参与宿主与病原菌的互作。SntA可能是SS2的一个毒力相关因子,因此本课题对sntA基因在SS2中的功能进行研究。本课题以pSET4s质粒为穿梭载体成功构建了SS2菌株sntA基因缺失突变株（△sntA）,比较了△sntA与野生型菌株的生长特性,发现两种菌株在对数生长期生长速度差异不明显,但△sntA更早进入生长平台期,限制了一定时间内细菌生长量的积累。比较△sntA与野生型菌株在Balb/c小鼠体内定植,试验结果表明△sntA在小鼠体内定植时间更长,sntA基因缺失后菌株的抗清除能力增强。以Hep-2细胞为模型,研究不同菌株对细胞的黏附特性,结果显示,sntA基因缺失后链球菌对Hep-2细胞的黏附能力与野生型菌株无明显差异,说明sntA基因的缺失不影响细菌对细胞的黏附能力。以Balb/c小鼠为模型,比较了△sntA与野生型菌株的毒力,结果显示△sntA的LD50（5×108）是野生型菌株LD50（2.5×108）的2倍,sntA基因缺失后菌株的毒力有所下降,但不显著。比较了SntA蛋白与猪链球菌2型灭活苗对Balb/c小鼠的免疫保护力,结果表明SntA蛋白具有免疫原性,用亲本菌株攻毒后,SntA蛋白免疫组显示了一定的免疫保护力,保护力明显高于Al（OH）3佐剂对照组,但不如猪链球菌2型灭活苗的保护力强。