论文摘要
[目的]：通过将肝实质细胞分离、纯化、体外培养，全面分析原代肝细胞的生长状态，研究酒精中间代谢产物—乙醛诱发大鼠肝细胞毒性和胞内游离Ca2+变化及Ca2+螯合剂的干预效应，探讨乙醛致肝细胞损伤机制及Ca2+螯合剂的保护作用。为肝细胞分子生物学的研究以及从细胞及分子水平探讨酒精性肝损伤的机理提供更有价值的依据，同时也为丌发干预急性酒精性肝损伤新药物提供了实验理论依据的模型，从一个新的角度对酒精性肝病的发病机制进行有益的研究，从而为酒精性肝病的临床治疗提供可靠的实验依据。[方法]：分离培养大鼠原代肝细胞，以含300mmol／L乙醛的培养基培养肝细胞24h、48h，相差倒置显微镜下观察肝细胞的形态变化。将大鼠原代肝细胞随机分为正常对照组、各浓度乙醛处理组和各浓度乙醛-Fluo-3／AM联合作用组，激光共聚焦显微镜分析肝细胞Ca2+的浓度([Ca2+]i)及线粒体跨膜电位（△ψm）变化。[结果]：相差倒置显微镜下，新分离的大鼠肝细胞折光性强，有立体感，乙醛处理肝细胞24h后肝细胞体积肿胀，颜色变深，颗粒粗糙，部分细胞脱壁，少量细胞出现细胞膜缺失，呈放星状：乙醛处理48h后，可见到肝细胞质变稀疏，细胞核固缩，表面出现胞膜疱，细胞膜破碎；相当一部分细胞破碎脱落可见到一些核已消失的肝细胞浆或残屑。经乙醛处理后，肝细胞[Ca2+]i随乙醛浓度增加而逐渐升高，线粒体跨膜电位△ψm随乙醛浓度增加而依次下降，加入Fluo-3／AM的乙醛处理的肝细胞△ψm平均荧光强度均比各对应浓度乙醛组有很大幅度的升高。[结论]：1．乙醛可导致严重的肝细胞极性紊乱，导致细胞损伤，形成不同程度的病理状态，从而在细胞及分子水平导致肝病形成。2．乙醛诱发肝细胞毒性和损伤可能与肝细胞[Ca2+]i升高有关，Ca2+螯合剂可改善和保护肝细胞[Ca2+]i稳态而减轻乙醛诱发的细胞毒性和损伤过程。
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