大鼠EPCs的标记方法及TBI大鼠外周血中的EPCs的变化趋势

论文摘要

目的:本研究组前期临床观测发现颅脑创伤（traumatic brain injury,TBI）患者外周血中内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）数量存在着先降低后上升的变化特征,为了进一步研究外周血中EPCs变化机理,须建立相关的动物研究平台。本研究目的:1.建立一种大鼠外周血中EPCs的分离、标记方法,使用流式细胞仪（flow cytometer,FCM）双抗体标记技术检测大鼠外周血中EPCs的数量;2.利用大鼠液压颅脑创伤（Fluid-Percussion injury,FPI）模型,探明TBI后大鼠外周血中EPCs的变化趋势;3.探讨TBI后EPCs与白细胞、血小板的相关变化趋势,为研究TBI后外周血中EPCs的变化机理提供参考。方法:1.使用健康成年雄性WISTER大鼠共45只（体重300-350g,鼠龄12周）,分为假手术对照组（n=10）及TBI组（n=35）。假手术对照组大鼠仅给予10%水合氯醛腹腔注射麻醉。TBI组使用液压打击仪及小动物立体定向仪,分别建立轻、中、重型大鼠闭合性颅脑液压损伤模型,轻型组（n=10）液压打击力度为1atm,中型组（n=10）液压打击力度为2atm,重型组（n=15）液压打击力度为3atm;2.TBI后24h,按照随机原则从各TBI组中各抽取2只大鼠分别进行头颅MR检查和脑组织切片HE染色,观察TBI的影像和病理特征。其余大鼠分别于伤前24h和伤后不同时间点（3h、6h、24h、48h、72h、240h、336h）使用硬质玻璃毛细采血管（φ=1mm）取大鼠内眦球后静脉丛血液约1.1ml,进行外周血EPCs测定,同时使用小动物外周血细胞检测设备进行白细胞和血小板测定;3.采用Ficoll密度梯度离心法分离大鼠外周血单个核细胞,以CD34、CD133双抗体阳性作为EPCs标志,使用CD34、CD133双抗体标记结合流式细胞计数方法,检测大鼠外周血中EPCs的数量。结果:对照组10只大鼠完成了各时间点大鼠外周血循环中相应指标测定;轻型TBI组中1只大鼠因打击后3天头部切口感染被剔除,其余7只大鼠完成了各时间点大鼠外周血循环中相应指标测定;中型TBI组中1只大鼠于打击后48h死亡,其余7只大鼠完成了各时间点大鼠外周血循环中相应指标测定;重型TBI组中2只于打击后24h死亡,4只于打击后48h死亡,其中1只因眼内眦取血处严重感染被剔除,其余7只大鼠完成了各时间点大鼠外周血循环中相应指标测定;实验中途死亡大鼠（n=6）的相应数据作为死亡组进行分析。1.大鼠外周血循环中存在表达CD34、CD133双阳性的EPCs,本研究测定显示:正常大鼠外周血循环中EPCs为33-61个/20万单个核细胞,平均为47个/20万单个核细胞;2.TBI后大鼠外周血中EPCs数量在伤后下降至正常水平以下,于伤后3h达最低点,至10-30个/20万单个核细胞,各组间下降幅度无显著差异;3.TBI后大鼠外周血中EPCs数量在伤后3-6h渐升高至正常水平以上,于伤后6h达最高点,轻型组平均升至80个/20万单个核细胞,中型组平均升至68个/20万单个核细胞,重型组平均升至51个/20万单个核细胞,此后EPCs逐渐下降,伤后24h各组EPCs均降至正常水平;TBI后死亡的大鼠外周血中EPCs在伤后3h也下降至最低点,在伤后3-6h虽有上升趋势,但达不到正常水平,死亡前外周血中EPCs呈持续下降趋势;4.TBI后大鼠外周血中EPCs数量变化与血小板、白细胞数量均无显著相关。结论:1.采用CD34、CD133双抗体标记技术结合使用流式细胞仪检测、可以良好地定量测定大鼠外周血中的EPCs;2.本实验显示:与TBI患者伤后外周血中EPCs的变化特征相似,TBI后存活的大鼠外周血的EPCs水平同样存在先降低,后增高,再逐渐降至正常的变化特征;3.外伤越严重,外周血中的EPCs增高幅度越小,而伤后死亡大鼠外周血中EPCs的水平持续于正常水平以下,提示:TBI后外周血中EPCs的水平持续低下是预后不良的指征。4.本实验显示:TBI大鼠伤后外周血中的EPCs的数量变化与血小板和白细胞数量均无显著相关。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 大鼠EPCs的标记方法及TBI大鼠外周血中的EPCs的变化趋势
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 外周血中EPCs与病理性血管再生的关系和临床研究进展
• 综述参考文献
• 致谢