论文摘要
背景子宫内膜异位症（Endometriosis，EMs）是一种妇科常见病，在育龄妇女中的发病率高达10％-15％。病因至今尚未明确，其中两个重要发病机制为：EMs患者在位内膜的凋亡下调，增殖上调，凋亡及增殖平衡被打破；以及EMs患者腹腔局部缺乏足够的免疫监视。腹腔镜手术是EMs诊断的金标准，能早期发现并更彻底地清除异位子宫内膜的微小病灶，因此成为EMs患者的首选手术方式。腹腔镜手术因其创伤小，术后疼痛轻微，住院时间短，恢复快及其独特的美容效果等优点倍受患者们青睐。随着腹腔镜手术应用的日益推广及提高，恶性肿瘤也可选择性地进行腹腔镜下切除。但自1978年首次报道了恶性肿瘤腹腔镜检查术后发生切口转移的病例以来，该问题逐渐引起学者们的重视。多项研究发现，腹腔镜手术中最常使用的二氧化碳（CO2）气腹技术对胃肠道某些肿瘤细胞有促进增殖，抑制凋亡作用，且增强了某些肿瘤细胞的侵袭性，从而促进了肿瘤细胞的转移。这可能与CO2气腹引起的腹腔局部压力升高，机体酸碱代谢紊乱、局部腹膜结构改变，尤其是对腹腔局部免疫的显著抑制等效应有关。由于腹腔镜在诊断和治疗EMs中独特的优越性，目前其在临床应用广泛。而尽管EMs是一种良性病变，但异位子宫内膜病灶却表现出异常的种植、侵袭、甚至转移等类似恶性肿瘤的生物学行为。这就使我们联想到EMs术后难免残留的异位内膜细胞是否与部分胃肠道肿瘤细胞一样，受到CO2气腹刺激而出现生长活跃现象呢。本课题结合当前对CO2气腹术的最新认识与EMs临床表型的特点，通过原代培养异位子宫内膜细胞建立EMs体外模型，并基于EMs的最新观点“在位内膜决定论”，同时观察CO2气体对异位及在位子宫内膜细胞增殖的影响，旨在探索CO2气腹是否具有促进EMs灶增殖效应，从而参与EMs复发。材料和方法选择本院经病理明确诊断的卵巢型子宫内膜异位症患者（n=10），术后取其卵巢子宫内膜异位囊肿壁，进行原代培养；及病理明确诊断的进行子宫切除手术的子宫内膜异位症患者（n=19）、子宫肌瘤患者（n=12），取其在位子宫内膜，进行原代培养。用二步法免疫组织化学鉴定所培养细胞。对体外培养的子宫内膜细胞进行模拟腹腔镜术中CO2气腹环境，用99.99％CO2维持压力15mmHg，处理90min。并设置对照组，与CO2组同时放置于同一个培养箱内90min，一个大气压下，恒温37℃，5％的CO2环境。处理后分别在24h、48h两个时间点用流式细胞技术监测其细胞周期分布，因异位内膜细胞数量有限只取48h这个时间点进行检测。且在处理后立即测得其培养基内pH值，并间隔10min监测pH值，直至pH值恢复至7.0左右。数据由均值±标准差（（?）±S）来表示，用χ2检验的统计学方法进行组间数据比较分析，检验水准α=0.05，双侧。所有实验数据用SPSS11.0统计软件包进行处理。结果1．体外培养的对应月经增生期异位子宫内膜细胞予以模拟CO2气腹后48h，相比对照组G0-G1期细胞数有减少趋势，S期、G2-M期细胞数有增多趋势。体外培养的对应月经分泌期异位子宫内膜细胞予以模拟CO2气腹后48h，相比对照组G0-G1期细胞数有增多趋势，S期、G2-M期细胞数有减少趋势，但差异均无统计学意义（p＞0.05）。2．EMs在位子宫内膜细胞及非EMs子宫内膜细胞予以模拟CO2气腹后24h及48h两时间点，相比对照组细胞周期分布无显著变化（p＞0.05）。3．EMs在位子宫内膜细胞原代培养24h，48h时G0-G1期细胞少于相应非EMs子宫内膜细胞，S期及G2-M期细胞多于相应的非EMs子宫内膜细胞。但差异均无统计学意义（p＞0.05）。4．模拟CO2气腹处理后培养基pH降低至6.2左右，并于2h内恢复至7.0左右。5．异位子宫内膜细胞原代培养成功率为63.0％（29／43），在位子宫内膜细胞的原代培养成功率高达96.9％（31／32）。两者比较有统计学意义（p＜0.05）。结论1．模拟CO2气腹对体外培养的异位子宫内膜细胞的增殖状况短期内无显著影响，但存在促进月经增生期异位子宫内膜细胞增殖的趋势，及抑制月经分泌期异位子宫内膜细胞增殖的趋势。2．模拟CO2气腹对体外培养的EMs在位子宫内膜细胞及非EMs子宫内膜细胞的增殖状况短期内无显著影响。但流式结果提示体外培养的EMs在位子宫内膜细胞的增殖能力强于非EMs子宫内膜细胞。3．CO2气腹在短时间内降低了子宫内膜细胞培养环境的pH值。4．异位子宫内膜细胞原代培养成功率较低，培养难度远高于在位子宫内膜细胞原代培养。