螺旋藻中脂肪酸GC-MS检测方法研究

论文摘要

本研究采用加速溶剂萃取仪从螺旋藻中萃取脂质,考查了不同溶剂的不同萃取效果,利用固相萃取技术和气质联用仪对螺旋藻中的脂肪酸组分进行了纯化和分析,优化了萃取溶剂,样品用量,SPE吸附剂用量和洗脱液的用量,得到了更纯净的脂质,从而在脂肪酸检测前移除了不必要的干扰物质。对于四种萃取溶剂对于脂质的萃取效率,依次为氯仿/甲醇,二氯甲烷/甲醇,乙醇,正己烷。本研究以螺旋藻中主要的脂肪酸组分为例,对比了两种萃取溶剂下的萃取效果；在固相萃取过程中针对不同萃取溶剂优化了样品量,吸附剂使用量及洗脱剂用量。结果表明该步骤可以有效的从脂质中出去大量色素物质,对于正己烷作萃取溶剂时,样品量应为0.5g,吸附剂量为0.3g,洗脱剂用量为5mL,对于氯仿/甲醇作萃取溶剂时,样品量应为0.1g,吸附剂量为0.3g,洗脱剂用量为7mL。本文还研究了该方法的回收率,在加标回收实验中使用三个不同浓度的脂肪酸甘油三酯标品,结果显示三种浓度的回收率分别在67.97～134.37%,74.20～99.13%,98.34～115.42%之间,总体上来说该方法的回收率较稳定。另外,本文还对比了DB-Wax, DB-5ms, VF-23ms三种毛细管色谱柱对37混脂肪酸甲酯的分离效果。结果表明,对于DB-Wax色谱柱,其柱流失较大,不适宜用于气质联用仪,并且不适用于脂肪酸组分的检测。DB-5ms色谱柱不能完全分离37种脂肪酸甲酯标品,而利用VF-23ms色谱柱,37种脂肪酸甲酯在该条件下完全可以被分离开来,且具有较好的分离效果和较低的柱流失,该方法为相关的脂肪酸检测提供了依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 螺旋藻的概况
• 1.1.1 螺旋藻简介
• 1.1.2 螺旋藻营养成分
• 1.2 脂质、甘油三酯、脂肪酸的结构与性质
• 1.2.1 脂质
• 1.2.2 甘油三酯
• 1.2.3 脂肪酸
• 1.3 常用的脂质提取技术
• 1.3.1 液液萃取法
• 1.3.2 柱层析法
• 1.3.3 超临界二氧化碳流体萃取法
• 1.3.4 加速溶剂萃取法
• 1.3.5 微波辅助脂质提取
• 1.4 固相萃取技术
• 1.4.1 固相萃取技术简介
• 1.4.2 固相萃取技术在脂肪酸检测中的应用
• 1.5 脂肪酸的检测技术
• 1.5.1 衍生化
• 1.5.2 脂肪酸的检测技术
• 1.6 气质联用技术
• 1.6.1 气质联用仪
• 1.6.2 气相质谱联用仪与气相色谱仪的主要区别
• 1.6.3 常用的定量方法
• 1.7 本论文的意义和研究内容
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 标准品
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 实验仪器
• 2.1.4 实验前的准备
• 2.2 仪器条件
• 2.2.1 加速溶剂萃取条件
• 2.2.2 GC-MS条件
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 加速溶剂萃取（ASE）
• 2.3.2 薄层色谱（TLC）
• 2.3.3 甲酯化
• 2.3.4 固相萃取（SPE）
• 2.4 标准溶液的制备
• 2.4.1 37混脂肪酸甲酯标准溶液的配置
• 2.4.2 5混甘油三酯标准溶液的配置
• 2.4.3 标准曲线的建立
• 2.5 定量方法
• 2.5.1 面积归一化
• 2.5.2 外标法
• 2.6 方法评价
• 2.6.1 准确度
• 2.6.2 精密度
• 2.6.3 灵敏度
• 3 结果与讨论
• 3.1 色谱柱的选择及条件优化
• 3.1.1 DB-Wax
• 3.1.2 DB-5ms
• 3.1.3 VF-23ms
• 3.2 目标物的标准曲线及其相关系数
• 3.3 甲酯化时间及水浴温度的优化
• 3.4 萃取溶剂的选择
• 3.5 净化步骤的优化
• 3.5.1 正己烷作为萃取溶剂的优化
• 3.5.2 氯仿/甲醇作为萃取溶剂的优化
• 3.5.3 两种萃取溶剂的对比
• 3.6 净化后的效果
• 3.7 回收率
• 3.8 实际样品的检测
• 4 结论
• 5 展望
• 6 参考文献
• 7 攻读硕士学位期间发表论文情况
• 8 致谢