油松花粉蛋白质酶水解制小肽的工艺研究

论文摘要

论文选择了乙醇、正己烷、水为提取溶剂,研究了不同溶剂条件对黄酮、不饱和脂肪酸和总产量的影响,在m乙醇:m正己烷=7:3和1:1时复合营养物的提取分别作了单因素试验,得出提取复合营养物的适宜条件为:（1）乙醇:正己烷=7:3时,温度50℃,反应时间3h,固液比1:10;（2）乙醇:正己烷=1:1时,温度50℃,反应时间3h,固液比为1:20。对复合提取物中的不饱和脂肪酸进行了液相色谱定性测定。本论文选取温度、乙醇浓度、固液比三个因素进行黄酮提取条件的优化,得出提取黄酮的最佳工艺条件:溶剂为70%乙醇,温度为70℃,液固比为20。用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH显色法测定总黄酮的产量为1.41%。采用响应面实验设计方法（RSD）对油松花粉中总黄酮提取工艺进行优化。其最优提取条件为:温度为80℃,溶剂乙醇浓度为56%,液固比为17.9,加热3.2h回流提取。在此条件下,测定总黄酮的产量为1.49%。采用定磷法,测定油松花粉中的总核酸为0.66%。利用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和双酶水解对油松花粉蛋白质进行水解制备小肽,确定了小肽的最佳水解条件:碱性酶水解:温度50℃、底物浓度4.5%、pH=10、水解时间2小时、酶浓度4000u/g。在此条件下,水解液的氮溶指数为80.30%。木瓜酶水解:温度为45℃、底物浓度为4.5%、pH值为6.5、水解时间为2小时、酶浓度为3000u/g。在此条件下,水解液的氮溶指数为41.63%。复合酶水解:温度为45℃、底物浓度为4.5%、pH值为9、木瓜酶水解时间为2小时、碱性酶与木瓜酶的比例为1:1。在此条件下,水解液的氮溶指数为69.75%。测定水解液清除·OH自由基的能力,碱性蛋白酶水解液的抑制率为40.57%,木瓜蛋白酶水解液的抑制率为29.25%,双酶水解液的抑制率为74.84%。同时测定水解液抗氧化活性AOV,碱性蛋白酶水解液的抗氧化活性为0.068mg/ml,木瓜蛋白酶水解液的抗氧化活性为0.034mg/ml,双酶水解液的抗氧化活性为0.119mg/ml。

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摘要

ABSTRACT

1 前言

1.1 油松花粉概况

1.1.1 油松花粉的营养成分

1.1.2 油松花粉的营养价值

1.2 油松花粉中营养物质的提取方法

1.2.1 黄酮类物质的提取方法

1.2.2 不饱和脂肪酸的提取方法

1.2.3 核酸的提取方法

1.3 油松花粉中营养物质的分析方法

1.3.1 黄酮类物质的分析方法

1.3.2 不饱和脂肪酸的分析方法

1.3.3 核酸的分析方法

1.4 小肽概况

1.4.1 小肽与传统蛋白质相比的优越性

1.4.2 小肽的营养作用

1.5 水解油松花粉蛋白制备小肽

1.5.1 小肽的制备方法

1.5.2 小肽的性能指标

1.6 本论文研究意义与主要研究内容

1.6.1 本论文的研究意义

1.6.2 本论文主要研究的内容

2 油松花粉中营养物质的提取

2.1 油松花粉中复合营养物质的提取

2.1.1 仪器

2.1.2 材料与试剂

2.1.3 实验方法

2.1.4 实验结果与讨论

2.2 油松花粉中总黄酮的提取与含量测定

2.2.1 仪器

2.2.2 材料与试剂

2.2.3 总黄酮含量测定方法原理

2.2.4 标准曲线的制定

2.2.5 总黄酮提取方法

2.2.6 实验结果与讨论

2.3 油松花粉中核酸的含量测定

2.3.1 仪器

2.3.2 材料与试剂

2.3.3 方法原理

2.3.4 核酸含量测定

2.4 油松花粉中不饱和脂肪酸的测定

2.4.1 仪器与试剂

2.4.2 方法原理

2.4.3 测定结果

2.5 本章小节

3 油松花粉蛋白水解制小肽

3.1 油松花粉粗蛋白提纯

3.1.1 仪器与材料

3.1.2 实验方案

3.1.3 氮含量测定

3.1.4 结果与讨论

3.2 蛋白酶水解油松花粉粗蛋白制备小肽

3.2.1 仪器与材料

3.2.2 实验原理

3.2.3 实验方法

3.2.4 碱性蛋白酶水解油松花粉蛋白制备小肽

3.2.5 木瓜蛋白酶水解油松花粉蛋白制备小肽

3.2.6 双蛋白酶水解油松花粉蛋白制备小肽

3.3 工艺小结

4 油松花粉小肽性能侧定

4.1 清除自由基能力测定

4.1.1 仪器与材料

4.1.2 实验原理

4.1.3 实验方法

4.1.4 实验结果

4.2 抗氧化能力AOV的测定

4.2.1 仪器与材料

4.2.2 实验方法

4.2.3 实验结果

4.3 本章小节

5 结论

6 展望

7 参考文献

8 攻读学位期间发表的论文

9 致谢

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