联合运用测序及MLPA技术对结节性硬化症患者进行遗传学诊断

论文摘要

背景：结节性硬化症（Tuberous sclerosis complex, TSC）是一种以多器官的组织缺陷和错构瘤为特征的系统性疾病,呈常染色体显性遗传,脑、眼、肾、心脏、皮肤为主要的受累器官,而肺、骨骼以及一些内分泌腺体有时也常常受到累及。患者典型症状是面部皮脂腺瘤、局部的皮肤病变、癫痫发作,精神发育迟滞以及多发性的错构瘤。且不同患者之间存在表型差异,从轻度到重度不等。西方人群的流行病学调查推测TSC出生时的发病率为1/6000,男女比例约为2-3：1,其中约2/3的TSC病例为散发,提示其有高度自发突变率。目前已知的与该病相关的致病基因有TSC1（MIM#605284）和TSC2（MIM#191092）两种。目的：对结节性硬化症患者进行遗传学分析,查明致病原因,为患儿父母再生育时的产前诊断提供依据。方法：对临床确诊为结节性硬化症的患者,联合运用直接测序和多重链接探针扩增技术（multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA）进行突变分析；对检出的未知突变在相关的家系成员和正常人群中作进一步的检查。结果：16名患者中,发现其中15名存在基因突变,其中涉及TSC1基因1例（为SNP位点）,涉及TSC2基因14例15种（其中SNP1种,同义突变1种）；致病性突变中,点突变11例,大片段缺失2例.结论：联合运用测序及MLPA技术可对结节性硬化症进行快速准确的诊断,同时能提高该病基因突变的检出率。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 主要实验仪器、试剂与耗材
• 英文缩略词简表
• 前言
• 1. 结节性硬化症概述
• 2. MLPA技术概述
• 一、研究对象
• 二、遗传学分析策略
• 三、研究方法
• 3.1 gDNA提取
• 3.2 TSC1和TSC2基因的测序分析
• 3.3 TSC1和TSC2基因的MLPA分析
• 四、实验结果
• 4.1 测序分析的结果
• 4.2 正常人群DNA样本对照分析结果
• 4.3 MLPA分析的结果
• 4.4 产前诊断及其结果
• 五、讨论
• 5.1 流行病学研究
• 5.2 患者之间的表型差异
• 5.3 联合运用测序及MLPA检测的优势
• 5.4 患者父母行基因检测以及产前诊断的必要性
• 5.5 本研究有待进一步深入探索的内容
• 六、结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历
• 攻读硕士学位期间主要研究成果