叶酸、核黄素及MTHFR多态性对人类淋巴细胞8和17号染色体非整倍体的影响

论文摘要

叶酸（Folic acid,FA）是人体必需的重要微营养物质,其涉及尿嘧啶脱氧核苷酸（dUTP）到胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTTP）的合成,并通过同型半胱氨酸（HC）合成甲硫氨酸（Met）、S-腺苷甲硫氨酸（SAM）的生化过程影响DNA甲基化；亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是叶酸代谢关键酶,它对各种衍生形式的叶酸在DNA甲基化或DNA合成之间的分支走向发挥着关键作用。核黄素（Riboflavin,RF）作为MTHFR辅酶黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide, FAD）的前体,其含量的变化可能影响MTHFR的活性,当FA, RF缺乏时,可能导致DNA甲基化水平降低,使着丝粒异染色质凝聚水平下降,影响染色体的分离。本论文研究了FA-RF不同浓度组合对人类淋巴细胞8和17号染色体分离的影响以及与乳腺癌易感性之间的相关性。研究分别设计了高、低两个叶酸浓度（200nM、20nM,以HF、LF表示）和两个核黄素浓度（500nM、1nM,以HR, LR表示）,分别交叉组合形成4种不同培养基（分别为LFLR、LFHR、HFLR、HRHF）。取自具有不同MTHFR基因型的乳腺癌患者及其对照（各20例）的淋巴细胞在上述培养基培养9天,以荧光原位杂交技术,分析8号和17号染色体分离情况。研究结果显示：1、经设计的四种FA-RF浓度组合培养后,乳腺癌和对照组非整倍体发生呈现相同趋势,在高叶酸培养条件（HFLR+HFHR,即HF）下,受试染色体非整倍体在单、双核细胞中的总频率显著低于低叶酸培养条件（LFHR+LFLR,即LF）（P<0.001）,而在相同叶酸浓度下,高核黄素组（HFHR+LFHR,即HR）和低核黄素组（HFLR+LFLR,即LR）间无显著差异；2、乳腺癌及对照组单核和双核细胞中的各类型染色体异常分离频率也以LF组居高。3、叶酸缺乏对受试染色体非整倍体发生的贡献率都达到显著水平（P<0.01）；而核黄素只对乳腺癌组的8号染色体在双核细胞中的非整倍体频率有显著影响（P＜0.05）, MTHFR C677T、A1298C对8、17号染色体分离都没有显著性影响,三个因素的交互作用对两条受试染色体的非整倍体发生频率均没有显著影响。4、在各种组合浓度下,乳腺癌组非整倍体总频率均显著高于对照组,但将样本固有背景值消减后,比较乳腺癌与对照受试染色体分离对FA-RF的敏感性发现：乳腺癌组在LFLR培养条件下的双核细胞8号染色体非整倍体总频率显著高于对照组（P<0.05）；乳腺癌组17号染色体非整倍体总频率在LFLR和LFHR条件下显著高于对照组（P<0.05）,其余培养条件下均无显著差异。由此结果提示,乳腺癌患者中的17号染色体对叶酸这一胁迫条件可能有特殊的敏感性。研究证明,叶酸对人类淋巴细胞染色体形成非整倍体有显著影响,而核黄素的作用不及叶酸,目前还没有发现MTHFR多态性对染色体形成非整倍体有显著影响。由此的得知,叶酸仍是我们的研究中影响染色体异常分离的主要因素,适量的补充叶酸有助于维持染色体的正常分离。

论文目录

• 英文缩写
• 摘要
• Abstract
• 第一部分 :研究报告
• 前言
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料、仪器及试剂
• 1.2 实验方法
• 1.3 结果的计数方法
• 1.4 统计方法
• 2 结果
• 2.1 叶酸、核黄素及MTHFR多态性与人类淋巴细胞形成非整倍体的关系
• 2.2 叶酸和核黄素缺乏在乳腺癌患者与正常人淋巴细胞中形成非整倍体频率的比较
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二部分 :综述
• 荧光原位杂交技术原理及其应用
• 攻读学位期间发表的学术论文情况
• 致谢