胰岛素模拟肽的筛选、合成和活性测定

论文摘要

胰岛素作为药物用于糖尿病治疗有其固有的缺点,寻找和设计天然胰岛素的小分子类似物,制备口服药物将具有很重大的现实意义。我们以CHO-IR细胞作为筛选靶点,从噬菌体展示十二肽库中筛选出多个阳性克隆。ELISA方法检测了阳性克隆与CHO-IR细胞的结合活性,PRISM 4.0软件计算其Kd值。Fmoc固相法合成A肽和B肽,反相HPLC进行纯化,质谱鉴定其分子量。建立体外葡萄糖消耗模型,检测合成A肽和B肽对葡萄糖消耗量的影响。Western印迹分析A肽对胰岛素受体酪氨酸磷酸化的影响。结果表明,阳性克隆的Kd值均为纳摩尔级,A肽和B肽在低浓度范围内能够协同胰岛素发挥降糖作用。Western印迹实验表明A肽能拮抗胰岛素与受体的相互作用。

论文目录

• 提要
• 第一章 前言
• 1.1 糖尿病的研究现状
• 1.1.1 糖尿病
• 1.1.2 胰岛素及其功能
• 1.1.3 胰岛素受体
• 1.1.4 胰岛素与受体的结合位点
• 1.1.5 胰岛素与受体的结合机制
• 1.1.6 胰岛素所激发的信号传递途径
• 1.2 噬菌体展示肽库技术
• 1.2.1 噬菌体肽库的起源和特点
• 1.2.2 噬菌体肽库的应用
• 本论文的设计思想
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验试剂
• 2.3 主要仪器
• 2.4 实验方法
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 肽库筛选
• 3.1.1 亲和筛选
• 3.1.2 重组噬菌体克隆Kd 值的测定
• 3.1.3 亲和短肽的氨基酸序列分析
• 3.1.4 小结
• 3.2 A 肽和B 肽的合成、纯化和鉴定
• 3.3 葡萄糖消耗实验细胞模型的建立
• 3.3.1 A/B肽对HepG2细胞增殖和葡萄糖消耗的影响
• 3.3.2 A/B肽和胰岛素共同作用对葡萄糖消耗的影响
• 3.3.3 小结
• 3.4 A 肽对胰岛素受体酪氨酸磷酸化的影响
• 3.4.1 胰岛素对受体酪氨酸磷酸化的影响
• 3.4.2 A 肽/胰岛素对受体酪氨酸磷酸化的影响
• 摘要
• ABSTRACT
• 参考文献
• 致谢