白花蛇舌草中四种活性成分的分离分析及药动学研究

论文摘要

据统计,在目前使用的具有抗癌作用的中药经验方中,白花蛇舌草的使用率最高,该药被广泛用于治疗各种肿瘤,尤其用于消化系统肿瘤,如食道癌、胃癌、肝癌、直肠癌等的治疗。本文从白花蛇舌草药材中的正丁醇层提取分离得到了对香豆酸、3,4-二羟基苯甲酸甲酯、山奈酚和反式6-O-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯。其中,3,4-二羟基苯甲酸甲酯为首次从白花蛇舌草中分离得到。3,4-二羟基苯甲酸甲酯属酚酸类化合物,药理研究表明,酚酸类化合物具有明显的抗氧化、清除自由基作用,可用于抗炎、抗菌、抗癌等。本文首次建立HPLC法测定了不同产地药材及不同厂家注射液中的3,4-二羟基苯甲酸甲酯的含量;研究了3,4-二羟基苯甲酸甲酯在不同pH的磷酸盐缓冲液中、不同温度、不同光照条件下及大鼠血浆中的稳定性;建立了测定大鼠血浆中3,4-二羟基苯甲酸甲酯的浓度的高效液相色谱-紫外检测方法,并研究了大鼠腹腔注射3,4-二羟基苯甲酸甲酯的体内药物动力学过程。1.白花蛇舌草中有效成分的提取分离及结构鉴定本研究从白花蛇舌草药材中提取制备了对香豆酸、3,4-二羟基苯甲酸甲酯、山奈酚和反式6-O-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯,并对它们的结构进行了确证。其中,3,4-二羟基苯甲酸甲酯为首次从该植物中分离得到。2.HPLC法测定白花蛇舌草药材及注射液中的3,4-二羟基苯甲酸甲酯的含量建立了HPLC法测定8个不同产地药材及3个厂家注射液中的3,4-二羟基苯甲酸甲酯的含量,色谱柱为C18柱,流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶液（15:85,v/v）,检测波长为254nm,流速为0.8mL·min-1,柱温为室温。采用正交试验设计方法考察了白花蛇舌草药材中3,4-二羟基苯甲酸甲酯提取方法,确定了最佳提取条件。3.3,4-二羟基苯甲酸甲酯的稳定性考察研究了不同pH值磷酸盐缓冲液、不同温度、不同光照条件对3,4-二羟基苯甲酸甲酯稳定性的影响,以及大鼠模拟血浆样品经历3次冷冻—解冻循环、-20℃放置10天和血浆样品经预处理后室温放置24小时稳定性。结果表明,3,4-二羟基苯甲酸甲酯的降解具有pH-依赖性和温度依赖性,且光照会加速降解。室温12h内,3,4-二羟基苯甲酸甲酯在酸性、中性和弱碱性条件下稳定,只在强碱性条件下降解。3,4-二羟基苯甲酸甲酯模拟血浆样品经历3次冷冻—解冻循环、-20℃放置10天和经预处理后室温放置24小时稳定。4.腹腔注射给予大鼠3,4-二羟基苯甲酸甲酯的药动学研究首次建立了测定大鼠血浆中3,4-二羟基苯甲酸甲酯的浓度的高效液相色谱-紫外检测方法,色谱条件为:DiamonsilTMC18（200mm×4.6mm,5μm）色谱柱,以甲醇-0.05%磷酸水溶液（22:78,v/v）为流动相,检测波长为254nm,柱温为室温。该法以对乙酰氨基酚做为内标,线性范围为0.12-18μg·mL-1,定量下限为0.12μg·mL-1。大鼠腹腔注射3,4-二羟基苯甲酸甲酯10mg/kg后,药物在体内迅速代谢,消除半衰期为5.65±0.9min,血药浓度-时间曲线下峰面积AUC0-t为191±32μg min/mL。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 白花蛇舌草的研究概况
• 1.1.1 白花蛇舌草的化学成分
• 1.1.2 白花蛇舌草的药理作用
• 1.2 本论文研究思路
• 第二章 白花蛇舌草活性成分的提取分离研究
• 2.1 仪器与试药
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试药
• 2.2 白花蛇舌草正丁醇层浸膏的提取
• 2.3 正丁醇层4种化合物的提取分离
• 2.4 化合物的结构鉴定
• 2.4.1 化合物Ⅰ的结构
• 2.4.2 化合物Ⅱ的结构
• 2.4.3 化合物Ⅲ的结构
• 2.4.4 化合物Ⅳ的结构
• 2.5 纯度检查
• 2.6 讨论
• 第三章 白花蛇舌草药材及注射液中3,4-二羟基苯甲酸甲酯的含量测定
• 3.1 仪器与试药
• 3.1.1 仪器
• 3.1.2 试药
• 3.2 色谱条件
• 3.3 白花蛇舌草药材中3,4-二羟基苯甲酸甲酯的含量测定
• 3.3.1 对照品溶液
• 3.3.2 供试品溶液
• 3.3.3 系统适用性试验
• 3.3.4 线性关系的考察
• 3.3.5 仪器精密度试验
• 3.3.6 重复性试验
• 3.3.7 稳定性试验
• 3.3.8 回收率试验
• 3.3.9 样品含量测定
• 3.4 白花蛇舌草注射液中3,4-二羟基苯甲酸甲酯的含量测定
• 3.4.1 对照品溶液
• 3.4.2 供试品溶液
• 3.4.3 系统适用性试验
• 3.4.4 线性关系
• 3.4.5 仪器精密度试验
• 3.4.6 重复性试验
• 3.4.7 稳定性试验
• 3.4.8 回收率试验
• 3.4.9 样品含量测定
• 3.5 讨论
• 3.5.1 提取溶剂的选择
• 3.5.2 提取方法的选择
• 3.5.3 提取条件的优化
• 3.5.4 流动相选择
• 3.5.5 不同产地药材中3,4-二羟基苯甲酸甲酯含量比较
• 3.5.6 测定注射液中3,4-二羟基苯甲酸甲酯的意义
• 第四章 3,4-二羟基苯甲酸甲酯的稳定性考察
• 4.1 仪器与试药
• 4.1.1 仪器
• 4.1.2 试药
• 4.2 不同pH缓冲液中3,4-二羟基苯甲酸甲酯的稳定性
• 4.2.1 磷酸盐缓冲液配置
• 4.2.2 对照品溶液配置
• 4.2.3 色谱条件与系统适用性试验
• 4.2.4 线性关系的考察
• 4.2.5 精密度与准确度试验
• 4.2.6 室温下不同pH值的磷酸盐缓冲液中3,4-二羟基苯甲酸甲酯的稳定性
• 4.2.7 不同温度下3,4-二羟基苯甲酸甲酯的稳定性
• 4.2.8 光照下3,4-二羟基苯甲酸甲酯的稳定性
• 4.3 大鼠血浆中3,4-二羟基苯甲酸甲酯的稳定性
• 4.4 讨论
• 第五章 3,4-二羟基苯甲酸甲酯在大鼠体内的药物动力学研究
• 5.1 仪器与试药
• 5.1.1 仪器
• 5.1.2 试药
• 5.2 大鼠血浆中3,4-二羟基苯甲酸甲酯分析方法的建立
• 5.2.1 血浆样品分析方法
• 5.2.2 系统适用性试验
• 5.2.3 分析方法确证
• 5.3 3,4-二羟基苯甲酸甲酯的药物动力学研究
• 5.3.1 试验对象
• 5.3.2 给药方案与样品采集
• 5.3.3 血浆样品测定
• 5.3.4 数据处理与结果分析
• 5.4 讨论
• 5.4.1 流动相的选择
• 5.4.2 内标物的选择
• 5.4.3 给药方式的选择
• 5.4.4 结果分析
• 第六章 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 在读期间发表学术论文目录