论文摘要
糖皮质激素（Glucocorticoid, GC）是由肾上腺皮质中束状带分泌的一类甾体激素,主要为皮质醇,具有调节糖、脂肪和蛋白质的生物合成和代谢的作用,还具有抑制免疫应答、抗炎、抗毒、抗休克等作用。糖皮质激素类药物主要有氢化可的松、泼尼松、泼尼松龙、地塞米松、甲泼尼龙、曲安奈德、倍他米松等。在临床上应用于肾上腺皮质功能减退、活动性风湿病、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮等胶原性疾病、严重的支气管哮喘、皮炎、过敏性疾病、急性白血病及感染性休克等。由于这些药物的药效迅速显著,所以应用较为广泛,但如果使用不当,副作用影响往往也是不可小视的。因此,在用糖皮质激素类药物进行治疗的过程中,了解和掌握用药后体内药物浓度的含量和分布情况,对合理用药,减少副作用是非常有帮助的,这就需要建立灵敏快捷的体内含量的分析方法。本课题选择糖皮质激素类药物中的卤米松、地塞米松和泼尼松为研究对象,针对其体内药物浓度的分析方法进行了研究。考虑到体内样本的基质比较复杂以及体内药物浓度较低的问题,我们采用了具有高分离效率、高专属性和高灵敏度的液质联用技术（LC-MSn）,建立了如下方法（1） LC-MS/MS法用于人血浆中卤米松的含量测定,（2） LC-MS/MS法同时测定小鼠血浆以及脏器中的卤米松、地塞米松和泼尼松的含量。在方法研究过程中,我们对样品前处理方法、色谱条件、质谱条件等各项实验条件进行了考察和优化。对于体内样品的测定而言,样品前处理技术不仅可以去除杂质,而且也是提高方法的选择性和灵敏度的重要步骤,我们采用模拟血浆样品,分别对几种常用的前处理方法（蛋白沉淀、液液萃取和固相萃取）进行了实验,同时引入了微固相萃取技术与之进行比较,结果显示：几种常用技术存在蛋白去除效率低、溶剂使用量大、操作复杂等缺点,而微固相萃取技术集分离和富集于一体,具有所需样品量少,富集倍数高,溶剂用量少和操作简便等优点。在色谱分离方面,主要对色谱柱、流动相等条件进行了试验和条件优化,在方法（1）中确定采用内径为1.0mm的微径色谱柱（Agilent ZORBAX SB-C18）,其优点是：灵敏度得到提高的同时降低了进样体积,从而减少了基质效应。对流动相的组成就行了优化,当水相中添加0.2 mmol·L-1的乙酸铵时,加强了方法的稳定性。在质谱分析方面,采用了最为常见的电喷雾离子化（ESI）方式,但在分析过程中由于共洗脱物质会对分析物的离子化过程产生抑制或增强作用,使得分析物在标准溶液和生物基质中的响应值产生差异,影响定量分析方法的准确度和精密度,这种现象被称之为基质效应（matrix effects, ME）。因此,我们在建立方法时,重点对基质效应进行了考察和评价,在此基础上对方法进行了优化,保证了方法的特异性、精密度和准确度。在方法（1）的基础上,我们又将测定的对象扩展到地塞米松和泼尼松的体内药物浓度测定,因此方法（2）可用以同时测定卤米松、地塞米松和泼尼松,不仅用于血浆样品,还可用于脏器样品。本课题的主要优点在于通过样品前处理技术的改进和色谱、质谱条件的优化,使分析方法的灵敏度、基质效应和提取回收率得到了极大的改善,且操作程序简便,而且符合当前绿色环保的理念。目前,本课题建立的方法已经成功应用于卤米松的临床样本（人血浆）的含量测定；小鼠血浆和脏器中卤米松、地塞米松和泼尼松的含量测定。为相关的临床试验研究提供了有力的手段和技术保证。
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