中国野生麋鹿BAFF、APRIL、TWEAK基因的克隆鉴定及生物学功能的研究

论文摘要

目前,肿瘤坏死因子家族已经鉴定的包括29个肿瘤坏死因子受体和19个肿瘤坏死因子配体。细胞因子类的肿瘤坏死因子家族具有多种生物学效应,包括活化细胞存活,分化,凋亡,诱发炎症等。其家族成员在机体的防御、炎症反应、免疫调节等过程中起着重要的作用,能够协调的调节淋巴,乳腺,神经和外胚层各种组织的发育分化和动态平衡。在肿瘤坏死因子超家族这些不同的成员中,现在最受关注而且研究的最为多的主要是B细胞活化因子（BAFF）,增殖诱导配体（APRIL）,肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂（TWEAK）。本文通过克隆表达及同源序列分析研究麇鹿的TNF超家族的这三个相关基因,实验结果如下：1. BAFF, APRIL, TWEAK基因的克隆及序列分析本实验室通过RT-PCR法,从麋鹿的血液淋巴细胞中扩增得到843bp的麋鹿B淋巴细胞刺激因子基因（简称miBAFF）,753bp的增殖诱导配体基因（简称miAPRIL）和747bp的肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂（简称miTWEAK）。通过序列分析和结构预测可以得出这三种TNF超家族的配体都属于Ⅱ型垮膜蛋白。具有TNF家族蛋白特有的跨膜结构区和TNF结构域。对三种基因进行同源比对发现麋鹿在进化关系上与牛羊等偶蹄目的亲缘关系最近,与斑马鱼等鱼类的亲缘关系较远2.体外表达可溶性的BAFF, APRIL, TWEAK蛋白并对其生物活性的研究将BAFF基因构建入SUMO原核表达载体,用BL21（DE3）体外表达可溶性的麇鹿的BAFF蛋白,并用SUMO蛋白酶切去SUMO标签。体外用MTT法检测表明麇鹿BAFF具有促进麇鹿淋巴细胞存活的作用,同时在anti-IgM的共刺激下具有促进小鼠的B淋巴细胞存活的作用。用BL21（DE3）表达构建的PET43.1-Nus-miAPRIL可溶性蛋白,通过体外激光共聚胶实验表明miAPRIL蛋白能够结合麇鹿淋巴细胞,通过流式和MTT检测结果表明麇鹿APRIL蛋白同样具有促进麇鹿淋巴细胞存活的作用,这为miAPRIL的进一步研究打下了基础。同时构建麇鹿TWEAK的原核表达载体并通过亲和层析得到纯度较高蛋白,为下一步生物活性的研究打下基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 文献综述
• 第一章 BAFF、APRIL、TWEAK的研究进展
• 1.1 B细胞活化因子（BAFF）的研究进展
• 1.2 增殖诱导配体（APRIL）的研究进展
• 1.3 肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂（TWEAK）的研究进展
• 第二章 中国野生麇鹿的研究进展
• 2.1 麋鹿的传统研究
• 2.2 糜鹿研究的前景
• 2.3 展望
• 第二部分 实验研究
• 第三章 麇鹿BAFF、APRIL、TWEAK基因的克隆及序列分析
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 实验结果与分析
• 3.4 讨论
• 第四章:麇鹿BAFF、APRIL、TWEAK基因生物学功能的研究
• 4.1 实验材料
• 4.2 试验方法
• 4.3 实验结果与分析
• 4.4 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 附录:硕士在读期间研究成果
• 致谢