Syk在人B淋巴瘤细胞中的表达及作用机理研究

论文摘要

Syk（Spleen Tyrosine Kinase）是一种非受体蛋白酪氨酸激酶,广泛表达于造血细胞、淋巴细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等细胞,在细胞信号转导中发挥着重要作用。Syk基因被认为是候选抑癌基因,对肿瘤的生长和转移有抑制作用。本研究中,我们对Syk基因在B淋巴瘤细胞中的表达及Syk基因启动子区5’CpG岛的甲基化情况进行了研究,初步探讨了Syk在B淋巴瘤细胞中的作用机理。方法:1应用免疫组化S-P法和Western-blot方法检测了人B淋巴瘤细胞株（Raji、Namalwa和Ramos）中Syk蛋白表达水平。2用RT-PCR方法检测Raji、Namalwa和Ramos细胞中Syk基因的表达。3 5-aza-CDR对B淋巴瘤细胞株的增殖、周期和凋亡情况的检测:用含5-aza-CdR处理Raji和Ramos细胞后,经MTT实验、流式细胞技术、DNA凝胶电泳和电子显微镜观察,分析了5-aza-CDR对B淋巴瘤细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。4 B淋巴瘤细胞中Syk基因甲基化状态检测:提取Raji和Ramos细胞DNA,经亚硫酸盐修饰纯化后,行甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR, MSP）检测Syk启动子区的甲基化情况。结果:1经抗Syk抗体免疫组化染色,Syk蛋白阳性反应为棕黄色颗粒,定位于细胞浆;胞浆不着色,视为阴性。Namalwa和Raji细胞中syk表达阳性,Ramos细胞syk表达阴性。Western-blot检测结果显示,Namalwa和Raji细胞表达syk,Ramos细胞中syk表达缺失。2用RT-PCR方法检测结果显示,Ramos细胞中未检测到syk mRNA表达;Namalwa和Raji细胞中syk mRNA表达阳性。3 Raji和Ramos细胞在去甲基化试剂5-aza-CdR作用下细胞增殖明显受到抑制。不同浓度5-aza-CdR（终浓度为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0μM）作用96小时,均可明显抑制细胞的增殖（P<0.05）,并具有剂量依赖性;用不同浓度的5-aza-CDR（0μm/L,0.1μm/L,0.5μm/L,1μm/L,2μm/L和5μm/L）处理后,Raji和Ramos细胞出现明显的细胞凋亡现象（P<0.05）,随着剂量的增加凋亡率明显增加（P<0.05）;但细胞周期未见明显改变。4 MSP结果示,Raji和Ramos细胞Syk基因启动子区未见甲基化现象。结论:1 Syk在B淋巴瘤细胞株Raji和Namalwa细胞中表达阳性,在Ramos细胞中表达阴性。2、5-aza-CDR能抑制Raji和Ramos细胞的增殖,并可诱导细胞凋亡,但细胞周期未见明显改变。3、Raji和Ramos细胞中,Syk基因的沉默与甲基化无关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写
• 研究论文 Syk 在人B 淋巴瘤细胞中的表达及作用机理研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 Syk 信号转导与细胞功能关系的研究进展
• 致谢
• 个人简历