扇贝多肽调节ROS/p38MAPK/caspase-3通路抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡

论文摘要

目的建立UVA诱导的HaCaT细胞凋亡模型，从活性氧（ROS）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）通路和半胱天冬酶-3（caspase-3）的角度，研究扇贝多肽（Polypeptide from Chlamys farreri，PCF）抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法采用正交实验设计，以流式细胞仪PI染色法测定细胞凋亡率，确立UVA诱导的HaCaT细胞凋亡模型。实验设计分为6组：对照组、UVA模型组、UVA+5.68 mmol·L-1维生素C阳性对照组、UVA+5.69 mmol·L-1PCF组、UVA+2.84mmol·L-1PCF组、UVA+1.42 mmol·L-1PCF组。以2，7-二氯氢化荧光素二酯（DCFH-DA）为荧光探针，检测PCF对UVA照射后细胞内ROS生成的影响；琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38MAPK抑制剂（SB203580）及caspase-3特异性抑制剂（Ac-DEVD-CHO）对细胞凋亡的影响；Hochest 33258荧光染色观察H2O2引起的细胞凋亡形态学改变及PCF对凋亡的影响：蛋白质印迹法检测p38MAPK、磷酸化p38MAPK及c-fos蛋白表达；Real-Time PCR检测c-fos mRNA表达；流式细胞术检测caspase-3的活性。结果正交实验结果表明，8J·cm-2 UVA照射HaCaT细胞后18 h为最佳凋亡模型；1.42～5.69 mmol·L-1剂量范围内的PCF可明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡及细胞内活性氧的产生（P＜0.05）；PCF对H2O2引起的核固缩等细胞凋亡形态学改变有显著抑制作用；预先加入SB203580和Ac-DEVD-CHO可明显抑制UVA诱导的HaCaT细胞DNA Ladder的形成；1.42～5.69 mmol·L-1剂量范围内的PCF可剂量依赖性抑制8J·cm-2 UVA引起的p38MAPK磷酸化、caspase-3的活化及c-fos mRNA和蛋白的表达（P＜0.05，P＜0.01）。结论PCF可抑制8J·cm-2UVA诱导的HaCaT细胞凋亡，其作用机理与抑制UVA诱导的ROS产生、p38MAPK通路激活和caspase-3活化有关。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一章 实验材料
• 1.1 主要试剂和材料
• 1.2 细胞株
• 1.3 仪器设备
• 第二章 实验方法
• 2.1 实验设计及模型建立
• 2.2 试验项目和指标检测
• 2.3 统计学处理
• 第三章 实验结果
• 3.1 UVA诱导HaCaT细胞凋亡模型的筛选
• 3.2 PCF抑制ROS的产生而抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡
• 3.3 PCF抑制p38MAPK激活而抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡
• 3.4 PCF对UVA诱导的c-fos表达的影响
• 3.5 PCF抑制caspase-3活化而抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡
• 3.6 附图
• 第四章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述及参考文献
• 附录
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢