论文摘要
目的本实验主要研究缺氧预处理对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）缺氧损伤的保护作用及其对缺氧损伤细胞内血管内皮生长因子（VEGF）、血管生成素（Ang-2）表达的影响,探讨缺氧预处理对HUVEC缺氧损伤的保护作用机制。方法（1）首先进行人脐静脉血管内皮细胞株的培养,在倒置相差显微镜下观察HUVECs形态,Ⅷ因子相关抗原进行免疫细胞化学鉴定;（2）建立稳定、可靠的体外HUVECs缺氧模型,将HUVECs分三组:正常组,缺氧组,缺氧预处理组,采用CCK-8法检测细胞活性,观察缺氧预处理对细胞活性的影响;（3）观察缺氧预处理对缺氧条件下细胞凋亡的影响:分正常对照组,缺氧组,缺氧预处理组,采用hoechst33258荧光染色观察缺氧预处理是否可以减少缺氧损伤后细胞凋亡;（4）研究缺氧预处理对缺氧条件下HUVECs内蛋白VEGF、Ang-2表达的影响:HUVECs分正常对照组、缺氧组、缺氧预处理组,采用western-bloting法及RT-PCR法检测缺氧预处理是否可以增加缺氧损伤细胞中蛋白VEGF、Ang-2的表达。结果（1）人脐静脉血管内皮细胞株培养及缺氧模型的建立,倒置相差显微镜观察细胞形态,正常细胞呈梭形或多角形,呈典型的铺路石样细胞,Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学鉴定,细胞胞浆有阳性表达;缺氧后细胞形态改变,细胞皱缩,胞体变小,胞质内有颗粒物沉积;缺氧预处理组细胞形态基本接近正常。（2）缺氧后细胞活性明显减低,下降至正常细胞的50%左右,缺氧预处理可显著提高缺氧损伤细胞的活力,可上升至正常对照组的75%,各组间有显著差异（P<0.05）;（3）hochest荧光染色结果显示缺氧组细胞凋亡率明显增高,与正常组比较细胞凋亡38%,缺氧预处理可减少细胞凋亡,凋亡率降至16%,各组间比较有显著差异（P<0.05）;（4）West-Bloting及RT-PCR结果提示:缺氧后细胞内VEGF、Ang-2蛋白及基因水平表达较正常增高,缺氧预处理后VEGF、Ang-2的表达可进一步增高（P<0.05）,各组间比较均有统计学意义。结论（1）建立一种简便、稳定、可靠的体外血管内皮细胞缺氧模型;（2）缺氧预处理可减轻血管内皮细胞缺氧损伤,提高内皮细胞活性,减少细胞凋亡;（3）缺氧预处理可上调缺氧血管内皮细胞中蛋白VEGF、Ang-2的表达,对HUVEC细胞缺氧损伤有一定的保护作用。
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