胸腺因子D抗鸭乙型肝炎病毒的体内实验

论文摘要

目的:创建鸭乙型肝炎病毒（DHBV）DNA TaqMan 荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测方法,调查成年福州麻鸭携带DHBV 情况并建立福州麻鸭后天感染乙型肝炎动物模型,观察胸腺因子D（TFD）在体内对DHBV 的抑制作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法:用PUCm-T 载体和DHBV DNA PCR 纯化产物连接,转染TOP10 菌,筛选阳性菌落,提取质粒,制作标准品;在DHBV 基因组S 区设计一对引物,并在引物间设计和荧光标记一段TaqMan 探针,严格优化反应物的组成和扩增条件,建立TaqMan 荧光定量PCR 检测方法并与地高辛标记探针斑点杂交法进行比较。采用常规PCR 法检测成年福州麻鸭的DHBV 感染情况;筛选1d 龄DHBV DNA（-）雏鸭,经静脉途径接种DHBV DNA 强阳性血清,建立福州麻鸭后天感染乙型肝炎动物模型;随机分组,实验组、干扰素对照组和空白对照组分别用TFD、人干扰素-α1b（IFN-α1b）和0.9%氯化钠溶液处理4w,停药后观察1w。用TaqMan 荧光定量PCR 法检测治疗前后血清和肝脏中DHBV DNA 含量,并检测用药后血清ALT、AST水平及肝组织HE 染色病理。结果:建立的DHBV DNA TaqMan 荧光定量PCR 法灵敏度为1000 拷贝/m1;在105-109拷贝/m1 之间,含量与Ct 值具有很好的线性（Ct=-2.83611n（x）+41.45,r=-0.9983） ;批内误差为1.50%-2.98%,批间误差为2.95%-3.24%。共检查162 份成年福州麻鸭血清,DHBV 阳性89 份,阳性率为55%;感染1d 龄DHBVDNA（-）雏鸭84 只,感染阳性80 只,感染阳性率为95.24%。动物模型用药4w后,TFD 治疗组的病毒抑制率显著高于空白对照组（分别是8.73%和-5.12%,P<0.05）,抗病毒效果与用药剂量和用药时间相关,但中剂量和大剂量组的病毒抑制率无显著性差异。停药1w 后,TFD 治疗组血清DHBV DNA 含量无反跳现象,肝脏DHBV DNA 含量显著低于空白对照组。治疗4w 和停药1w 后血清ALT、AST及肝脏病理检查结果,TFD 治疗组与空白对照组无显著性差异。

论文目录

• 1. 中文摘要
• 2. 英文摘要
• 3. 前言
• 4. 第一部分鸭乙型肝炎病毒 DNA TaqMan 荧光定量 PCR 的建立
• 4.1 材料与方法
• 4.2 结果与分析
• 4.3 讨论
• 5. 第二部分成年福州麻鸭DHBV 携带情况调查及后天感染乙型肝炎动物模型的建立
• 5.1 材料与方法
• 5.2 结果与分析
• 5.3 讨论
• 6. 第三部分胸腺因子 D 抗鸭乙型肝炎病毒的体内实验
• 6.1 材料与方法
• 6.2 结果与分析
• 6.3 讨论
• 7. 总结
• 8. 参考文献
• 9. 致谢
• 10. 综述