榆耳菌丝体多糖的分离纯化及结构的初步研究

论文摘要

榆耳是一种传统的食药用真菌。大量文献表明,从榆耳深层发酵液中提取的醇溶性物质有抗氧化活性。本研究采用酶法脱除粗多糖中蛋白,确定最佳蛋白酶的种类及除蛋白质的最优条件；以羟基自由基、DPPH自由基和亚硝基的清除率为指标评价了榆耳菌丝体多糖的体外抗氧化活性。并且对分离纯化后的多糖进行结构鉴定。用水提醇沉法提取榆耳菌丝体中的粗多糖,并用酶法脱除粗多糖中蛋白质。选取木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶去除多糖中蛋白质,通过比较这几种酶的脱蛋白效果,最终确定木瓜蛋白酶脱蛋白效果较好,其蛋白去除率为56%。通过单因素及响应面分析法确定木瓜蛋白酶除多糖中蛋白质的最优条件为：酶与糖液的体积比0.21：1、酶解温度58℃、pH值6.13、酶解时间3h。此条件下所得蛋白去除率与多糖损失率的比值：理论值为4.50,实测值为4.34,实测值与理论值接近,偏差较小。榆耳菌丝体多糖经分离纯化得到三个组分GIP-a,GIP-b和GIP-c。其中浓度为0.2mg/ml的GIP-c对羟基自由基的清除率为61.4%,浓度为0.05mg/ml的GIP-c对DPPH自由基的清除率为83.6%。GIP-c经进一步分离纯化得到分子量为1.9×103 kDa的组分GIP-c1。GIP-c1由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,其摩尔比为5.0:2.6:1.0:29.2:49.3:10.6.GC/MS分析表明GIP-c1主要以（1→6）-Man,（1→ 6）-Glc,（1→）-Glc和（1→6）-Gal为主要连接,同时含有少量的（1→3）-Glc,（1→3,6）-Glc, （1→3）-Man和（1→3,6）-Man。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 食（药）用真菌多糖概述
• 1.1.1 多糖简介
• 1.1.2 食（药）用真菌多糖的研究现状
• 1.2 真菌多糖的研究进展
• 1.2.1 真菌多糖的提取、分离、纯化
• 1.2.1.1 真菌多糖提取方法
• 1.2.1.2 真菌多糖的除蛋白方法
• 1.2.1.3 真菌多糖的分离纯化
• 1.2.2 多糖的结构鉴定
• 1.2.2.1 水解法
• 1.2.2.2 甲基化分析法
• 1.2.2.3 红外光谱法
• 1.2.3 真菌多糖的生物活性
• 1.2.3.1 真菌多糖的免疫调节作用
• 1.2.3.2 真菌多糖的抗肿瘤作用
• 1.2.3.3 真菌多糖的抗氧化作用
• 1.2.3.4 真菌多糖的肝和胰脏保护作用
• 1.3 榆耳
• 1.3.1 榆耳简介
• 1.3.2 榆耳的研究概况
• 1.3.2.1 榆耳营养成分研究
• 1.3.2.2 榆耳人工栽培研究
• 1.3.2.3 榆耳抑菌活性研究
• 1.3.2.4 榆耳多糖的抗氧化活性
• 1.3.2.5 真菌多糖的结构鉴定
• 1.3.2.6 榆耳多糖的结构鉴定
• 1.3.3 榆耳的经济价值和发展前景
• 1.4 研究的意义及内容
• 1.4.1 研究意义
• 1.4.2 研究内容
• 第二章 酶法除榆耳多糖中蛋白质的研究
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 实验仪器
• 2.1.2 主要实验药品
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 榆耳菌丝体粗多糖的提取
• 2.2.1.1 榆耳菌丝体液体发酵培养基的制备
• 2.2.1.2 榆耳菌丝体的接种及培养方法
• 2.2.1.3 热水提取榆耳菌丝体多糖
• 2.2.1.4 榆耳菌丝体多糖的醇沉
• 2.2.1.5 多糖的测定方法
• 2.2.1.6 蛋白质的测定方法
• 2.2.2 不同酶法除蛋白
• 2.2.3 木瓜蛋白酶法除蛋白的单因素实验设计
• 2.2.4 分析方法
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 榆耳菌丝体粗多糖的提取实验结果
• 2.3.2 不同酶法除蛋白结果
• 2.3.3 木瓜蛋白酶除蛋白单因素条件探索
• 2.3.4 中心复合响应面优化实验
• 2.4 结论
• 第三章 榆耳菌丝体多糖的分离纯化
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 实验仪器
• 3.1.2 主要实验药品
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 榆耳菌丝体多糖的初步纯化
• 3.2.1.1 分级醇沉多糖样品的制备
• 3.2.1.2 Sevage法除蛋白
• 3.2.2 榆耳菌丝体多糖的分离与纯化
• 3.2.2.1 DEAE-cellulose 52阴离子交换层析
• 3.2.2.2 DEAE Sepherose CL-6B柱层析
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 榆耳粗多糖分级醇沉试验结果
• 3.3.2 DEAE-52阴离子交换柱洗脱分离结果
• 3.4 结论
• 第四章 榆耳菌丝体多糖抗氧化活性的研究
• 4.1 实验材料
• 4.1.1 实验原料
• 4.1.2 主要实验仪器与设备
• 4.1.3 主要实验试剂
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 榆耳多糖抗氧化活性的测定
• 4.2.1.1 对羟基自由基清除作用的测定
• 4.2.1.2 对DPPH自由基清除作用的测定
• 4.2.1.3 对亚硝基清除作用的测定
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 榆耳多糖对羟基自由基的清除作用
• 4.3.2 榆耳多糖对DPPH自由基的清除作用
• 4.3.3 对亚硝基的清除作用
• 4.4 结论
• 第五章 榆耳菌丝体多糖结构的初步研究
• 5.1 实验材料
• 5.1.1 主要实验仪器与设备
• 5.1.2 主要实验药品
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 高效液相色谱法鉴定多糖纯度
• 1紫外光谱分析'>5.2.2 GIP-c₁紫外光谱分析
• 1红外光谱分析'>5.2.3 GIP-c₁红外光谱分析
• 5.2.4 单糖组成测定
• 5.2.5 甲基化单糖气质联用色谱分析
• 5.3 结果与分析
• 1的高效液相凝胶色谱分析'>5.3.1 GIP-c₁的高效液相凝胶色谱分析
• 1的紫外光谱分析'>5.3.2 GIP-c₁的紫外光谱分析
• 1的红外光谱分析'>5.3.3 GIP-c₁的红外光谱分析
• 1的单糖组成分析'>5.3.4 GIP-c₁的单糖组成分析
• 5.3.5 气质联用色谱分析
• 5.4 结论
• 第六章 结论与展望
• 6.1 结论
• 6.2 展望
• 参考文献
• 致谢