HRM技术在炎症性肠病患者TPMT基因多态性的检测中的应用性研究

论文摘要

背景:硫唑嘌呤是治疗炎症性肠病的常用免疫抑制剂,由于其严重的骨髓抑制毒副作用,已有的研究显示该药物副作用与硫嘌呤甲基转移酶（TPMT）基因突变有关。目的:应用HRM技术检测炎症性肠病患者TPMT基因多态性,探索炎症性肠病（IBD）患者TPMT基因型与硫唑嘌呤（AZA）致骨髓抑制的关系。方法:采集了82例IBD患者和53例健康志愿者的外周血,使用QIAamp DNA Blood Minikit（德国Qiagen公司生产）提取其中的DNA,采用聚合酶链反应-高分辨熔解曲线（PCR-HRM）与Sanger法序列测定相结合的方法,检测上述人群中3种常见的TPMT突变等位基因TPMT*3A（G460A/A719G）、TPMT*3B（G460A）、TPMT*3C（A719G）。结果:临床资料:82例IBD（UC 38例/CD 42例/IC 2例）,根据是否使用AZA治疗分为A、B两组。其中A组有31例患者,使用AZA的剂量为50-100mg/d,（男20/女11）,平均年龄39.6（18-68）岁。健康对照组为C组（男28/女25）,平均年龄41.06（23-68）岁。A组与C组、B组与C组年龄无统计学差异。TPMT基因多态性检测出了TPMT*1/*3C杂合子6例,占4.44%（6/135）;IBD患者（A+B组）中TPMT*1/*3C杂合子4例,占4.88%（4/82）,TPMT*3C基因频率为2.44%。健康对照者（C组）中TPMT*3C杂合子2例,占3.77%（2/53）,TPMT*3C基因频率为1.89%。未检测出TPMT*3A和TPMT*3B型突变。IBD患者的4例出现骨髓抑制的患者中,1例是TPMT*1/*3C杂合子;其余3例为TPMT野生型。另外检测出了TPMT*1S（T474C）突变,IBD患者（A+B组）中TPMT*1S（T474C）纯合型占1.96%,杂合型占35.85%,基因频率为:C19.81%。健康对照组（C组）中TPMT*1S（T474C）纯合型占2.44%,杂合型占39.02%,基因频率为:C 21.95%。结论:存在基因突变的IBD患者对硫唑嘌呤不能耐受,导致骨髓抑制。然而TPMT基因突变可以解释部分AZA治疗IBD导致骨髓抑制的病例,但不能解释大部分病例。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 目的
• 实验流程图
• 正文
• 材料和方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附:对炎症性肠病诊断治疗规范的建议（2000年）（节选）
• 综述
• 致谢