论文摘要
鹅细小病毒是细小病毒科细小病毒属成员,其生物学特性类似番鸭细小病毒,可引起最急型、急型、亚急型小鹅瘟。3-20日龄的雏鹅均可感染发病,主要通过消化道进行水平传播,也可通过种蛋进行垂直传播。发病雏鹅和隐性感染成鹅是该病毒的主要传染源。本病有明显的季节性,多发于春季。由于其感染雏鹅传播快、病程短、病死率高,使其成为严重危害养鹅业的重要病原之一,引起国内外学者的广泛重视。为了解鹅细小病毒（GPV）在雏鹅体内的分布、复制特点,为该病毒的致病机理等研究提供可靠的实验数据,本实验建立了能对石蜡切片中鹅细小病毒（GPV）进行抗原定位的免疫荧光法和核酸定位的原位PCR方法。应用鸭胚大量培养SP株GPV病毒,收获尿囊液,纯化后制备GPV抗原。免疫家兔,当琼扩效价达到1：32时,颈动脉放血制备兔抗GPV血清。血清经饱和硫酸铵法粗提和DEAE-sephadex-A 50离子交换层析得到兔抗GPV抗体,应用该抗体建立了检测GPV的免疫荧光法,以便研究GPV病毒在雏鹅体内定植规律。与此同时,根据GPV的VP3基因序列,设计PCR引物和寡核苷酸探针,以GPV感染鹅组织制作石蜡切片,经蛋白酶K消化、原位PCR扩增和碱性磷酸酶标记的寡核苷酸探针原位杂交,建立了检测石蜡切片中GPV的间接原位PCR方法。其优化后条件为组织切片先用10μg/ml的蛋白酶K37℃消化20 min；杂交过程中探针的工作浓度为5 ng/ml, Dig-AP的工作稀释度为1：500。利用建立好的免疫荧光法和间接原位PCR法并对GPV病毒在雏鹅体内的动态分布情况进行了研究,发现GPV病毒具有组织泛嗜性,两种方法检测雏鹅体内GPV的动态分布规律大体一致。除鼻部组织未检测到GPV病毒外,其他组织中均检测到了GPV的存在,病鹅通过泪腺和直肠传播GPV病毒是GPV水平传播的潜在途径。原位PCR法检测阳性信号出现的时间较免疫荧光法早。