红缘拟层孔菌（Fomitopsis pinicola）抑制肿瘤保健品的研制

论文摘要

本论文对红缘拟层孔菌[Fomitopsis pinicola （Sw.:Fr.）P. Karst.]进行了发酵工艺的研究并对其发酵产物和所含的单体化合物（3-乙酰氧基-8,24-羊毛甾二烯-21-酸）进行了抗肿瘤和免疫增强实验的研究,并在此基础上研制出了一种抑制肿瘤的保健品（红缘抑瘤片）。本文以红缘拟层孔菌为发酵菌株,对其发酵所采用的基础培养基进行筛选,并对红缘拟层孔菌的升罐发酵工艺进行研究,结果表明最适基础培养基为：马铃薯200g/L,葡萄糖20g/L,磷酸二氢钾1g/L,硫酸镁1.5g/L,维生素B10.4g/L。红缘拟层孔菌在以上条件升罐发酵结果：最佳发酵周期为56-64h,在此条件下菌丝体干重达到6.8901g/L,胞外粗多糖含量达到0.2965g/L。实验对发酵产物和氯仿提取物中获得的单体化合物（3-乙酰氧基-8,24-羊毛甾二烯-21-酸）进行了体内抗肿瘤活性研究并对单体化合物进行了细胞凋亡实验研究。通过测定小鼠的脾脏指数和胸腺指数来检测各组分对荷瘤小鼠免疫功能的影响。实验结果表明发酵产物组和单体化合物组对H22荷瘤小鼠具有较高的抑瘤率,在剂量为5mg/kg/d时,单体化合物3-乙酰氧基-8,24-羊毛甾二烯-21-酸的抑制率达到63.09%,胸腺指数明显高于环磷酰胺（CTX）组（P<0.05）,而接近于正常组（P>0.05）；其次,发酵产物组的抑瘤效果也很明显,在剂量为100mg/kg/d（其含量相当于单体化合物0.3mg/kg/d）时的抑制率达到56.76%,胸腺指数明显高于环磷酰胺（CTX）组（P<0.01）,而接近于正常组（P>0.05）；在细胞凋亡实验中,单体化合物作用后的细胞凋亡率仅为23.2%,接近阴性对照组的20.9%,促进细胞凋亡效果不明显。结合实验结果可推断单体化合物（3-乙酰氧基-8,24-羊毛甾二烯-21-酸）为红缘拟层孔菌抗肿瘤活性成分之一,提高机体免疫活性可能是其抗肿瘤作用的机理之一,但其作用机理还有待于进一步研究。本实验首次采用小鼠为模型对红缘拟层孔菌的干燥菌丝体进行了增强免疫活性的研究。实验测定了小鼠的器官免疫指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率、血清溶血素水平、ConA诱导小鼠脾脏淋巴细胞转化率和小鼠碳廓清实验的吞噬指数。小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验结果表明,实验组小鼠的吞噬率达到了72.8%,明显高于阴性对照组的51%（P<0.01）。血清溶血素实验中,实验组的溶血素水平达到了54.678,明显高于阴性对照组的37.532（P<0.01）。在ConA诱导小鼠脾脏淋巴细胞转化实验的体内实验中,实验组淋巴细胞转化率高达55.333%,明显高于阴性对照组的35.501%（P<0.01）.小鼠碳廓清实验结果表明,药物作用后的小鼠的吞噬指数显著增加,说明红缘拟层孔菌菌丝体能增强机体的非特异性免疫功能。实验结果表明,实验组小鼠在生存状态、吞噬率、血清溶血素水平、淋巴细胞转化率和小鼠碳廓清实验中的吞噬指数方面都大大优于对照组小鼠。实验结果证明了红缘拟层孔菌的干燥菌丝体能提高小鼠的免疫活性,但其作用机理还有待于进一步研究。本文采用干法制粒研制出一种抑制肿瘤的片剂保健品——红缘抑瘤片。确定其剂量为红缘拟层孔菌干燥菌丝体10g,乳糖20g,微晶纤维素（MCC）20g,硬脂酸镁0.5g。本实验还测定了红缘拟层孔菌发酵产物中化合物（3-乙酰氧基-8,24-羊毛甾二烯-21-酸）的含量,结果表明该化合物在菌丝体中的含量达到0.314%,实验还初步对红缘拟层孔菌发酵产物的毒理进行研究,研究表明红缘拟层孔菌发酵产物LD50的测定实验中,小鼠没有死亡,活动正常也没有中毒的迹象,没测到红缘拟层孔菌发酵产物的LD50值；在测定其最大耐受量实验中,小鼠在给药剂量为8000mg/Kg时,同样没有出现死亡现象。所以可以由此得出结论：红缘拟层孔菌发酵产物没有毒性,实验还对红缘抑瘤片的稳定性、用法用量和保存方法进行了初步的研究,证明其稳定性良好,易于保存,便于口服,是一个具有大规模生产开发的抑制肿瘤新型保健品。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 红缘拟层孔菌的研究现状
• 1.1 化学成分的研究
• 1.2 药理活性的研究
• 1.3 发酵方面的研究
• 1.4 对木质素和纤维素的降解作用
• 1.5 讨论
• 第二章 红缘拟层孔菌菌丝发酵工艺的研究
• 2.1 材料与设备
• 2.2 红缘拟层孔菌菌丝发酵基础培养基的筛选
• 2.3 红缘拟层孔菌菌丝升罐发酵工艺的研究
• 2.4 小结与讨论
• 第三章 红缘拟层孔菌发酵产物的药理活性研究
• 3.1 红缘拟层孔菌发酵产物的抗肿瘤活性研究
• 3.2 红缘拟层孔菌发酵产物中有效成分抗肿瘤机理研究
• 3.3 红缘拟层孔菌发酵产物免疫活性研究
• 3.4 讨论
• 第四章 红缘抑瘤片的研制
• 4.1 红缘抑瘤片的研制
• 4.2 红缘拟层孔菌干燥菌丝体中有效成分含量的测定
• 4.3 红缘拟层孔菌干燥菌丝体的毒理学研究
• 4.4 发酵产物农药残留的检测
• 4.5 小结与讨论
• 第五章 结论
• 5.1 结论
• 5.2 创新点
• 5.3 展望
• 附录
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 附件