论文摘要
目的：构建针对人转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1，TGF-β1）的RNA干扰（RNA interference，RNAi）真核表达质粒载体，为进一步研究RNAi对纤维化疾病的治疗作用奠定基础。方法：应用生物信息学技术从GeneBank上查找到人TGF-β1 cDNA序列，参考siRNA的设计原则，成功设计了3条针对人TGFβ1基因的不同序列的siRNA及其相应的阴性对照siRNA。成功设计并合成了上述siRNA相应的shRNA的编码DNA，将其分别退火形成shRNA双链并与psiSTRIKE Neomycin载体连接。将连接产物转化大肠杆菌（E. coli）DH5α，提取质粒，经PstⅠ酶切鉴定筛选出重组质粒，DNA测序分析DNA插入片段的序列。结果：经BLAST序列比对证实3条siRNA与人TGF-1基因同源而与其它基因无同源性，3条阴性对照siRNA与人类基因组DNA无序列同源性。重组载体经PstⅠ酶切产生958bp和3655bp两条带，与预期结果相符。基因测序证实DNA插入片段序列与所设计的shRNA编码DNA序列完全一致。结论：成功构建了针对人TGF-β1基因的siRNA真核表达载体及其阴性对照siRNA真核表达载体，从而为进一步研究RNAi对纤维化疾病的治疗作用奠定基础。