CD147参与白藜芦醇诱导的人恶性黑色素瘤细胞G361凋亡及机制研究

论文摘要

目的探讨白藜芦醇对人恶性黑色素瘤细胞株G361的生物学效应及CD147在其中的作用机制。方法1.用不同浓度的白藜芦醇（Rev）处理人恶性黑色素瘤细胞株G361,时间为48 h,MTT的方法检测不同浓度白藜芦醇对G361细胞增殖的影响。2.用Western blot的方法检测白藜芦醇对G361细胞株中XIAP,Caspase-9和Caspase-3表达的影响。3.用RT-PCR、Western blot的方法检测白藜芦醇对G361细胞株中CD147表达的影响。4.用瞬时转染的方法将CD147全长cDNA转入G361细胞,以转染空载体作为对照,随后加或不加白藜芦醇,分别标记为：空载组,CD147转染组,CD147转染组+Rev,用Western blot的方法检测各组细胞中CD147, XIAP,Caspase-9和Caspase-3蛋白水平的变化。5.用流式细胞仪检测空载组,CD147转染组,CD147转染组+Rev细胞的凋亡。6.电子显微镜观察空载组,CD147转染组,CD147转染组+Rev细胞的形态学变化。结果1.MTT结果显示：白藜芦醇能抑制人恶性黑色素瘤细胞株G361细胞的增殖能力,且随浓度的增加,抑制能力也相应增强,IC50=21.06±0.383μM,根据IC50的值,确定后面实验的药物作用浓度为0μM,2μM,4μM,8μM,16μM。2.不同浓度的白藜芦醇作用G361细胞48 h后,其X连锁凋亡抑制蛋白XIAP的表达水平下调,而Caspase-9和Caspase-3的表达上调,说明白藜芦醇能促进G361细胞的凋亡。3.用不同浓度白藜芦醇处理G361细胞48 h,加药组细胞中的CD147mRNA水平低于未加药组,当浓度为2μM,4μM,8μM,16μM时,比率分别为62.82%,56.27%,50.27%,43.25%（P<0.05）。但加药组不同浓度间CD147mRNA水平无显著差异（P>0.05）。CD147蛋白水平随白藜芦醇浓度的增加降低,呈浓度依赖。根据已得的实验结果,选择浓度为16μM的白藜芦醇分别处理G361细胞0h,12 h,24h,48 h,96 h,不同作用时间G361细胞中的CD147mRNA和蛋白水平并无明显改变（P>0.05）。4.与空载组比较,CD147转染组细胞中的CD147和XIAP的蛋白表达水平上调,而caspase-3和caspase-9的蛋白表达水平降低,用白藜芦醇处理CD147转染组,下调CD147的表达水平,XIAP的蛋白表达水平也随之降低,而caspase-3和caspase-9的蛋白表达水平增高,证明白藜芦醇能通过下调CD147的表达影响XIAP,Caspase-9和Caspase-3的表达。5.CD147转染组用白藜芦醇干预后,G361细胞的凋亡率为2.38%,显著高于空载组和CD147转染组（P<0.05）,空载组的凋亡率为0.76%,而CD147转染组的凋亡率为0.30%,低于空载组,说明CD147对G361细胞的凋亡有保护作用,而白藜芦醇能通过下调CD147的表达诱导G361细胞的凋亡6.CD147转染组+Rev细胞体积变小,胞质浓缩,出现许多空泡化结构,星月状小体等一系列凋亡细胞的特征。结论1.白藜芦醇能抑制人恶性黑色素瘤细胞株G361细胞的增殖,促进其凋亡。2.白藜芦醇能抑制G361细胞中CD147mRNA水平的表达,并以浓度依赖的方式抑制G361细胞中CD147蛋白水平的表达,与作用时间无关。3.CD147对人恶性黑色素瘤细胞株G361的凋亡具有保护效应,白藜芦醇能通过下调CD147进而影响XIAP,Caspase-9和Caspase-3的表达诱导细胞凋亡。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略语
• 前言
• 第一章 材料和方法
• 1.1 研究对象
• 1.2 主要试剂和仪器
• 1.3 主要试剂的配制
• 1.4 实验方法
• 1.5 统计分析
• 第二章 结果
• 2.1 MTT检测白藜芦醇对G361细胞增殖的抑制作用
• 2.2 白藜芦醇能影响G361细胞中XIAP,caspase-3和caspase-9的表达
• 2.3 白藜芦醇抑制G361细胞中CD147的表达
• 2.4 白藜芦醇能通过调节CD147的表达影响XIAP,caspase-3和caspase-9蛋白水平的表达
• 2.5 白藜芦醇通过调节CD147的表达影响G361细胞的凋亡
• 2.6 CD147表达改变后G361细胞凋亡的检测结果
• 第三章 讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 综述恶性黑色素瘤研究进展
• 致谢