论文摘要
目的:探讨TGF-β1对体外培养的骨髓间充质干细胞（BMSCs）VEGF表达的影响方法:（1）体外原代培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,每日观察细胞生长状态,并鉴定。（2）将不同浓度的TGF-β1按不同的时间点作用于BMSCs,用ELISA方法观察上清液中VEGF蛋白的表达,RT-PCR观察VEGF mRNA的表达。（3）TGF-β1按1小时、2小时、3小时预处理BMSCs,观察磷酸化Akt及磷酸化Erk的表达。（4）Akt通道阻断剂LY294002、Erk通道阻断剂U0126预处理1小时后,TGF-β1作用于BMSCs24小时,分别用ELISA和RT-PCR观察VEGF蛋白及其mRNA表达情况。（5）LY294002和U0126预处理1小时后,TGF-β1作用于BMSCs,分别观察1小时、2小时、3小时后,磷酸化Akt及磷酸化Erk1/2的表达。结果:（1）成功培养出大鼠BMSCs,流式细胞仪鉴定细胞表面标记物CD45（-）CD90（+）,本实验中使用的细胞为第3-5代细胞。（2）TGF-β1能够呈时间-浓度-依赖性促进BMSCs表达VEGF,并在蛋白和mRNA水平上验证。（3）TGF-β1促进BMSCs表达VEGF的作用能够被Akt通道特异性阻断剂Ly 294002所拮抗,也能被ERK1/2的特异性阻断剂U0126所阻断,表明Akt和ERK1/2通道可能参与了这一过程。结论:TGF-β1能够在体外呈时间-浓度-依赖性促进大鼠BMSCs表达VEGF,并且这种促分泌作用可能是通过Akt和ERK1/2通道的激活来实现。
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