葛根素诱导血管生成的作用及分子机制研究

论文摘要

目的：研究葛根素诱导血管生成的作用及其分子机制。 方法：分别采用体外培养大鼠胸主动脉环模型和心肌梗死大鼠模型，应用显微镜记数的方法，测定培养大鼠胸主动脉环的血管生成情况；用TTC染色的方法测定心肌梗死面积；免疫组化的方法检测心肌微血管密度（MVD）；分光光度法检测血清NO的水平；RT-PCR的方法检测心肌HIF-1、VEGF、eNOS mRNA的表达；Western-Blot的方法检测心肌eNOS、iNOS、AKT、p-AKT蛋白表达。 结果：①葛根素有明显的抗心肌缺血的作用，60～120mg／kg葛根素腹腔注射四周能明显缩小大鼠心肌梗死面积。②葛根素能明显诱导血管生成：实验表明，6.25～100mg／mL葛根素均能促进体外培养大鼠胸主动脉环血管生成作用；120mg／kg葛根素腹腔注射四周能明显增加心肌梗死大鼠缺血心肌和非缺血心肌的微血管密度。③葛根素诱导血管生成的作用主要与其激活HIF-VEGF-AKT-eNOS-NO信号转导机制有关，主要表现在以下几个方面：a RT-PCR结果显示增加心肌梗死大鼠心肌HIF-1、VEGF、eNOS mRNA表达；b Western-Blot结果显示增加心肌梗死大鼠心肌eNOS蛋白表达和AKT磷酸化水平的蛋白表达；c 增加心肌梗死大鼠血清NO水平。 结论：葛根素在体内外试验中均有诱导血管生成作用，这可能是葛根素抗心肌缺血作用的重要机理，葛根素诱导血管生成作用的分子机制与其激活HIF-VEGF-AKT-eNOS-NO信号转导通路有关。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 前言
• 实验部分
• 1 药品的制备
• 1.1 试剂和器材
• 1.2 药品的配置
• 1.3 样品含量的测定
• 1.3.1 检测波长的选择
• 1.3.2 色谱条件
• 1.3.3 干扰实验
• 1.3.4 线性范围
• 1.3.5 样品测定
• 2 葛根素促进体外培养动脉环血管形成的作用
• 2.1 实验动物
• 2.2 试剂与器材
• 2.3 溶液配置
• 2.4 实验方法
• 2.5 统计学处理
• 2.6 实验结果
• 3 葛根素对大鼠心肌梗死的治疗作用
• 3.1 实验动物
• 3.2 试剂与器材
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 造模、动物分组及给药
• 3.3.2 梗死面积的测量
• 3.4 统计学处理
• 3.5 实验结果
• 3.5.1 一般情况观察
• 3.5.2 葛根素对心肌梗死大鼠梗死面积的影响
• 4 葛根素对心肌梗死大鼠心肌MVD的影响
• 4.1 实验动物
• 4.2 实验器材和试剂
• 4.3 液体配置
• 4.4 实验步骤
• 4.5 统计学处理
• 4.6 实验结果
• 5 葛根素对心肌梗死大鼠血清NO含量的影响
• 5.1 实验器材
• 5.2 实验试剂
• 5.3 实验原理
• 5.4 实验步骤
• 5.5 统计学处理
• 5.6 实验结果
• 6 葛根素对心肌梗死大鼠心肌VEGF、HIF、eNOS的mRNA表达的影响
• 6.1 实验器材
• 6.2 实验试剂
• 6.3 液体配制
• 6.4 实验步骤
• 6.4.1 实验动物造模和给药
• 6.4.2 RT-PCR步骤
• 6.5 统计学处理
• 6.6 实验结果
• 7 葛根素对心肌梗死大鼠eNOS、iNOS,AKT,P-AKT蛋白表达的影响
• 7.1 实验器材
• 7.2 实验试剂
• 7.3 液体配制
• 7.4 蛋白提取
• 7.5 蛋白质含量
• 7.6 电泳
• 7.7 蛋白质的免疫印迹
• 7.8 统计学处理
• 7.9 实验结果
• 讨论
• 1 实验模型的选择
• 1.1 动脉环培养实验模型的评价
• 1.2 心肌梗死动物模型的评价
• 2 葛根素对心肌缺血的治疗作用
• 3 葛根素诱导血管生成的作用
• 3.1 血管生成的定义与背景
• 3.2 血管生成的中医理论基础
• 3.3 血管生成在心肌梗死治疗中的作用
• 3.4 葛根素对血管生成的诱导作用
• 4 葛根素诱导血管生成的机理
• 4.1 血管生成的信号转导途径
• 4.2 葛根素对血管生成信号转导途径中主要分子的作用
• 小结
• 问题与展望
• 参考文献
• 综述一：血管新生在冠心病治疗中作用
• 综述二：中药与血管生成
• 综述三：葛根素治疗心肌缺血机理研究进展
• 发表的SCI论文
• 致谢
• 在校期间公开发表的学术论文和科研成果