人体尿液中蝶呤类化合物分析方法研究

论文摘要

本文综述了当前临床上恶性肿瘤的诊断手段、肿瘤标志物的分类,并从检测方法及临床应用两方面对蝶呤类化合物的研究现状进行了概述,建立了四种分析方法并应用于健康人及癌症病人尿液中蝶呤类化合物的检测,为探讨蝶呤类化合物与癌症的关联性奠定了一定的实验基础。本文主要研究成果如下:1.简单介绍了恶性肿瘤的发病趋势及危害性,说明了恶性肿瘤早期诊断的重要性,并对肿瘤病理诊断的新技术进行了归纳,进一步阐明了采用肿瘤标志物进行检查成为了早期肿瘤诊断的重要检测方法的意义所在。另一方面,还总结了用于临床诊断的肿瘤标志物的种类,并就目前国内外正在开展的研究方向进行了讨论,探索和找寻新的特异性强、灵敏度高的肿瘤标志物和探索多种肿瘤标志物同时检测的方法,成为了各相关领域科学家们共同努力的方向。同时蝶呤类化合物在临床上已有一定的研究,尤其以新蝶呤和生物蝶呤的研究较多,本章从检测方法和应用领域两大方面对蝶呤类化合物的研究现状进行了概述。2.研究了一种同时测定人尿中黄蝶呤和异黄蝶呤的同步荧光分析方法。在KH2PO4-NaOH缓冲溶液（pH 8.0）中,波长差（△λ）为65 nm的条件下进行同步荧光扫描,可有效排除尿液中其它物质对黄蝶呤和异黄蝶呤测定的干扰,而黄蝶呤和异黄蝶呤也能得到有效分离。黄蝶呤的质量浓度在0.011-0.56μg/mL范围内与荧光强度呈良好的线性关系,线性方程为Y=6637.4X-10.988,相关系数r=0.9999。异黄蝶呤的质量浓度在0.022-0.43μg/mL范围内与荧光强度呈良好的线性关系,线性方程为Y=10763X-1.3713,相关系数r=0.9999。黄蝶呤添加到健康人和癌症病人尿样中的平均回收率分别在89.8%-90.3%及90.0-90.8之间,其相对标准偏差（RSD）分别为1.76%-2.15%及1.50%-3.19%。异黄蝶呤添加到健康人和胃癌病人尿样中的平均回收率分别在84.3%-95.5%及92.3%-99.7%之间,其相对标准偏差（RSD）分别为1.44%-3.75%及0.70%-1.54%。方法可应用于人尿中黄蝶呤和异黄蝶呤的同时测定。3.探讨了高效液相色谱-荧光法测定人体尿液中蝶呤-6-羧酸的分析方法。色谱条件:乙腈-水体系（5:95,V/V）作为流动相,流速0.8mL/min,荧光检测波长:Excitation 360 nm,Emission 440 nm。尿样经0.45μm的一次性微孔滤膜过滤后,按选定色谱条件进行分析。蝶呤-6-羧酸含量在0.007μg/mL-2.4μg/mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,线性回归方程为y=394.55x+1.24,相关系数为0.9999,检测限为0.002μg/mL。3种浓度的蝶呤-6-羧酸的平均回收率在101.3%-104.6%之间,相对标准偏差小于7.1。该方法简单、快速、准确、灵敏度高,可用于人体尿液中蝶呤-6-羧酸含量的测定。4.建立了人体尿液中蝶呤-6-羧酸的高效液相色谱.紫外分析新方法。运用Lichrospher C18柱（250×4.6 mm,5μm）,甲醇-水（70:30,V/V）为流动相,流速为0.4 mL/min,可较好地将尿液中蝶呤-6-羧酸与其他共存干扰物质分离。在355nm检测波长下,蝶呤-6-羧酸在0.19-4.8μg/mL范围内呈良好线性关系,相关系数为0.9999,方法检测限为0.015μg/mL。尿液经0.45μm滤膜过滤后,可直接进样分析,方法简便,应用于癌症病人和健康人尿样中蝶呤-6-羧酸测定,结果较好。方法的加标回收率为94.6%-100.2%,相对标准偏差为0.81%-5.07%。5.系统地研究了积分脉冲安培检测器各电位对蝶呤-6-羧酸测定的影响,探讨了尿液中蝶呤-6-羧酸色谱分离条件,建立了离子色谱测定人体尿液中蝶呤-6-羧酸的分析新方法。蝶呤-6-羧酸在1.0μg/L-100μg/L浓度范围内具有良好的线性关系,线性回归方程为A=0.0318C+0.0277,相关系数为0.9998,检测限为0.5μg/L。应用于实际尿样分析,结果较好。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 肿瘤标志物的类型及应用
• 1.2.1 肿瘤标志物的类型
• 1.2.2 肿瘤标志物的临床应用
• 1.3 蝶呤类化合物的研究进展
• 1.3.1 蝶呤类化合物概况
• 1.3.2 样品前处理方法
• 1.3.3 蝶呤类化合物检测方法和临床意义
• 1.4 本论文研究的主要内容
• 第二章 同步荧光法同时测定人体尿液中黄蝶呤和异黄蝶呤
• 2.1 引言
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 主要仪器与试剂
• 2.2.2 标准溶液配制
• 2.2.3 实验方法
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 蝶呤类化合物荧光特性
• 2.3.2 波长差△λ的选择
• 2.3.3 pH值对黄蝶呤和异黄蝶呤荧光强度的影响
• 2.3.4 缓冲溶液用量选择
• 2.3.5 稳定性实验
• 2.3.6 工作曲线及检出限
• 2.3.7 共存物质的影响
• 2.3.8 样品分析
• 2.3.9 回收实验
• 2.4 结论
• 第三章 高效液相色谱-荧光分析法测定人体尿液中的蝶呤-6-羧酸
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 主要仪器与试剂
• 3.2.2 色谱条件
• 3.2.3 标准储备液配制
• 3.2.4 样品预处理
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 荧光检测波长选择
• 3.3.2 流动相的组成及流速选择
• 3.3.3 标准曲线及检测限
• 3.3.4 尿样前处理方法选择
• 3.3.5 尿样分析
• 3.3.6 回收率与精密度实验
• 3.4 结论
• 第四章 高效液相色谱-紫外检测法测定人体尿液中的蝶呤-6-羧酸
• 4.1 引言
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 主要仪器与试剂
• 4.2.2 标准溶液配制
• 4.2.3 样品前处理方法
• 4.2.4 色谱分析条件
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 流动相的组成及流速的选择
• 4.3.2 标准曲线与检测限
• 4.3.3 干扰实验
• 4.3.4 样品前处理方法选择
• 4.3.5 回收率与精密度试验
• 4.3.6 尿样分析
• 4.4 结论
• 第五章 离子交换色谱-积分脉冲安培法测定人体尿液中的蝶呤-6-羧酸
• 5.1 引言
• 5.2 实验部分
• 5.2.1 主要仪器与试剂
• 5.2.2 样品前处理方法
• 5.2.3 色谱分析条件
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 淋洗液浓度的影响
• 5.3.2 安培检测器的波形条件的优化
• 5.3.3 标准曲线和检测限
• 5.3.4 共存物干扰试验
• 5.3.5 尿样分析
• 5.3.6 回收率与精密度试验
• 5.4 小结
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的论文