下尿路梗阻后膀胱结构重塑及功能障碍的研究

论文摘要

目的:下尿路梗阻导致的膀胱功能障碍是临床治疗的难点和研究的热点。目前对一氧化氮合酶（nitric oxide synthase , NOS）和一氧化氮（NO）在正常及梗阻膀胱中的作用机制仍有争议。本研究通过建立大鼠膀胱出口不全性梗阻（partial bladder outlet obstruction ,PBOO）模型,研究NOS各亚型在膀胱组织中的表达、膀胱结构重塑及功能障碍、氧化应激损害三者之间的关系,探讨NOS作为保护梗阻性膀胱功能治疗靶点的可行性。方法:1. 24只SD雄鼠随机分为四组:正常（NORMAL）及假手术对照组（SHAM）、膀胱出口不全性梗阻3周（PBOO3W）和6周（PBOO6W）组。以尿道外支架法建立PBOO模型。各组大鼠均接受麻醉下在体膀胱测压评价膀胱功能,膀胱称重和膀胱肌肉胶原纤维染色（Masson染色）评价膀胱肥大纤维化程度,客观反映梗阻造成的膀胱结构重塑和功能障碍。2.通过实时定量PCR（Q-PCR）检测NOS mRNA在膀胱组织中的表达变化,免疫组织化学染色定位NOS蛋白,免疫印记（western blotting）检测NOS单体和二聚体表达情况,分光光度法检测NOS亚型活力及氧化应激损害水平,探讨NOS、膀胱结构重塑及功能障碍、氧化应激损害三者之间的关系。3.对梗阻3周（PBOO3W）已经形成膀胱结构重塑及功能障碍的SD大鼠给予NOS辅助因子四氢生物蝶呤（BH4）、NO供体L-精氨酸（L-arg）、抗氧化剂Vit-C干预3周,通过上述功能学、形态学、分子生物学指标,探讨NOS作为保护梗阻膀胱功能治疗靶点的可行性。结果:1.与对照组相比,梗阻导致膀胱重量显著性增加（P<0.05）和膀胱重量与体重的比值明显增加（P<0.05）;Masson染色显示梗阻膀胱肌肉肥大胶原纤维沉积增多;梗阻导致显著性的最大排尿压降低、残余尿量增加（P<0.05）、排尿间隔延长和排泄容积增加,PBOO6W组甚至出现充盈性排尿。2. Q-PCR、免疫组化及western blotting均未在膀胱组织中检测到神经型NOS（nNOS）表达。Q-PCR结果显示梗阻导致膀胱组织中诱导型NOS（iNOS）、内皮型NOS（eNOS） mRNA表达降低;western blotting显示梗阻膀胱组织中变性iNOS和eNOS单体表达下降但与对照组之间没有明显差异（P>0.05）,非变性的eNOS单体与单体二聚体之和的比值明显增加（P<0.05）即eNOS解耦连失活增多。梗阻膀胱组织中丙二醛（MDA）水平明显升高、过氧化物歧化酶（SOD）活性明显降低（P<0.05）,氧化应激损害加重。3.与PBOO6W、L-arg、Vit-C组相比,BH4干预导致膀胱重量、膀胱重/体重较轻（P<0.05）,肌肉肥大胶原纤维沉积较轻,膀胱残余尿量降低、最大收缩压和排尿量明显增加（P<0.05）,eNOS单体与单体二聚体之和的比值显著性降低（P<0.05）即eNOS再耦连增多或解耦连减少,氧化应激损伤较轻（P<0.05）;而Vit-C组氧化应激损伤减轻;L-arg组与PBOO6W组相似。结论:尿道外支架法能成功诱发大鼠膀胱结构重塑和功能障碍,具有较好的重复性和稳定性。梗阻导致膀胱组织中iNOS和eNOS表达有降低趋势,但eNOS蛋白解耦连失活在梗阻膀胱结构重塑及功能障碍、氧化应激损害中占主导作用。NOS辅助因子BH4通过促使解耦连失活的eNOS再耦连或eNOS解耦连减少,对梗阻膀胱功能起到保护效应。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 参考文献
• 第一部分 建立下尿路梗阻导致膀胱结构重塑及功能障碍的大鼠模型
• 1 材料与方法
• 2 实验结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 5 参考文献
• 第二部分 NOS 在梗阻性膀胱中的表达及作用
• 1 材料与方法
• 2 实验结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 5 参考文献
• 第三部分 BH4 保护梗阻性膀胱功能的实验研究
• 1 材料与方法
• 2 实验结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 5 参考文献
• 全文总结
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录