王志新1肖明明2
（1辽宁省沈阳市康平县人民医院妇产科辽宁康平110500)
(2辽宁省人民医院病理科辽宁沈阳110016）
【中图分类号】R737.39【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）19-0018-02
【摘要】目的评估绝经后乳腺癌妇女服用他莫昔芬(tamoxifen，TAM)后Ki-67、PTEN在子宫内膜中的表达。方法2004年1月-2008年1月采用免疫组化法测定辽宁省人民医院妇科42例TAM组及对照组40例萎缩性子宫内膜、40例子宫内膜单纯性增生中Ki-67、PTEN的表达。结果TAM组与对照组比较,TAM组Ki-67高表达及PTEN低表达或表达缺如，与对照组有显著差异性。结论TAM能够引起绝经期子宫内膜增生,并不促进细胞凋亡,这些细胞增殖与凋亡因子及其发挥作用的通路可能在乳腺癌TAM服用者子宫内膜病变的发病机制中起作用。
【关键词】他莫昔芬子宫内膜绝经期
他莫昔芬(TAM),70年代后期以来,作为人工合成的非甾体类雌激素拮抗剂,被广泛用于乳腺癌的辅助治疗,以改善乳腺癌患者的生存期。临床实验结果显示:TAM能抑制对侧乳腺癌发生,危险性减少35%～50%。自1985年Killackey等首次报告TAM治疗的乳腺癌病人发生子宫内膜癌以来,一些肯定或否定TAM与子宫内膜癌关系的报告陆续发表，TAM对绝经后妇女的子宫内膜是一种弱雌激素激动剂,长期服用,可能引起内膜异常改变,本研究的目的是评估绝经期乳腺癌妇女服用TAM后细胞增殖抗原Ki-67、PTEN在子宫内膜中的表达。
1资料与方法
1.1研究对象辽宁省人民医院妇科2004年1月至2008年8月共随诊了42例绝经后因乳腺癌服用TAM（20mg/d）超过6个月的妇女，病人年龄为(56.8±9.1)岁（47-73岁），平均服用TAM时间（28.7±16.4）个月（6-65个月）。42例患者做组织病理学检查除外不典型增生及子宫内膜癌，同时选择40例绝经后6个月内未应用激素治疗因子宫脱垂行全子宫切除术患者的萎缩子宫内膜及40例绝经后子宫内膜单纯性增生作为对照组。其妇女的年龄、绝经时间、孕产次差异无统计学意义。
1.2试剂与方法采用S-P免疫组化。兔抗人PTEN多克隆抗体（即用型）为美国Zymed公司产品，购自北京中山生物技术有限公司。鼠抗人Ki-67单克隆抗体（即用型）、S-P广谱超敏试剂盒(即用型)、DAB酶底物显色剂、多聚-L-赖氨酸防脱片剂等均购自福州迈新生物技术开发公司。石蜡切片常规脱蜡、水化，进行微波抗原修复，继以免疫组化试剂盒进行检测。操作步骤按说明书进行，DAB显色，苏木精复染。以阳性片及PBS代替一抗设阳性及阴性对照。
1.3免疫组化结果判定PTEN阳性染色主要定位于细胞质中,偶可见于细胞膜和(或)细胞核,Ki-67蛋白阳性染色定位于细胞核,以各种抗体在细胞胞质或胞核出现棕黄色颗粒为阳性信号。每例均随机观察5个高倍视野(×400),用半定量积分法判断结果,阳性细胞≤5%为0分,6%～25%为1分,26%～50%为2分,51%～75%为3分,>75%为4分;阳性强度黄色为1分,棕黄为2分,棕褐色为3分。两者积分相乘,0分为阴性(-),1～4分为弱阳性(+),5～8分为中度阳性(6),9～12分为强阳性(+++)。实验结果采用SPSS12.0统计软件进行χ2检验、Fisher精确概率法,Spearman等级相关分析。
2结果
PTEN、Ki-67蛋白的子宫内膜组织表达：免疫表型:不同子宫内膜组织中PTEN蛋白主要表达于胞质,偶尔可见细胞核、细胞膜着色。Ki-67蛋白主要表达于子宫内膜组织的腺上皮及基质细胞的细胞核。PTEN在萎缩性子宫内膜的腺上皮细胞胞质中均呈阳性表达，子宫内膜单纯性增生中PTEN表达存在不同程度的表达减弱或消失,TAM组宫内膜组织中PTEN失表达率最高。从萎缩性子宫内膜、子宫内膜单纯性增生到TAM组子宫内膜PTEN阳性表达率呈递减趋势;Ki-67蛋白的阳性表达率呈递增趋势。Spearman等级相关分析显示PTEN表达程度与子宫内膜组织学分级呈负相关(r=-0.541,P<0.01),Ki-67表达程度与子宫内膜组织学分级呈正相关(r=0.496,P<0.01)。χ2检验、Fisher精确概率法检验显示,TAM组子宫内膜中的PTEN、Ki-67蛋白表达与除不典型增生以外的子宫内膜单纯性增生及萎缩性子宫内膜组织差异有显著性(P<0.05),TAM组子宫内膜与萎缩性子宫内膜、子宫内膜单纯性增生组PTEN蛋白表达差异有显著性(P<0.05),TAM组子宫内膜与子宫内膜单纯性增生的Ki-67表达差异有显著性(P<0.05),其余各组间PTEN、Ki-67蛋白的阳性表达率差异无显著性(P>0.05)。
3讨论
3.1TAM上调子宫内膜细胞增殖标志物——Ki67Ki-67核抗原是与细胞增殖相关的抗原,只在增殖期表达(G1,S和G2/M期),却不表达于静止期细胞(G0期),与细胞有丝分裂密切相关,预示着即将进入分裂期的细胞数目。Ki-67只与增殖细胞核反应,而无组织特异性,其表达增强是细胞有丝分裂,增殖活性增强的一个可靠标记。Tregon等报道,正常绝经期妇女服用TAM21d后Ki-67无论在子宫内膜腺体上皮还是基质都频繁表达,说明TAM快速上调细胞增殖标志物,这一结果与腺体增生发生率升高一致。Hachisuga等发现绝经后因乳腺癌服用TAM的妇女与未服药妇女比较,Ki-67指数明显升高,本研究结果与此相符。绝经后乳腺癌妇女服用TAM后,Ki-67在良性子宫内膜上皮细胞呈现高表达,表明子宫内膜呈较高的增殖状态,而失去控制的细胞增殖可导致子宫内膜增生及内膜癌。TAM应用者子宫内膜癌的发病危险增加2～3倍,高增殖状态很可能在其发生中发挥作用,Ki-67的高表达可能作为此类病人子宫内膜增生程度增加趋势的标志。
3.2PTEN基因与子宫内膜癌的发生、发展研究表明,PTEN基因是子宫内膜癌中突变率最高的抑癌基因。Mutte等用免疫组化法检测了138例子宫内膜组织,包括绝经前正常增生期子宫内膜、子宫内膜复合型增生和EIN(子宫内膜上皮内瘤样病变),其PTEN蛋白的失表达率分别为43%、56%和63%,对正常增生期子宫内膜的突变分析显示:所有PTEN蛋白表达的腺体为正常(野生型)的表型,而PTEN失表达的腺体84%存在PTEN基因的突变或10q2313的杂合性丢失。推测PTEN阴性的腺体很可能将来发展成为EIN,提示常规组织学检查正常的子宫内膜组织用免疫组化法可检测出潜在的癌前病变,为子宫内膜癌及其癌前病变的早期诊断提供参考。本研究发现40例萎缩性子宫内膜组织的PTEN蛋白均阳性表达,子宫内膜单纯性增生中PTEN蛋白的表达存在不同程度的减弱或缺失,TAM组中PTEN蛋白的失表达率最高,达61.90%。表明由于突变或其他机制造成的PTEN基因功能及表达异常发生于子宫内膜癌的早期,PTEN表达的改变在子宫内膜细胞恶性转化和癌变过程中发挥重要作用,不典型增生是子宫内膜癌的癌前病变,PTEN功能异常不但发生于子宫内膜癌组织,而且发生于癌前病变组织,从正常增殖期子宫内膜、癌前病变到内膜癌的发展过程中PTEN表达丢失逐渐积累。因此,用免疫组化法检测PTEN蛋白表达的丢失是诊断子宫内膜癌及其癌前病变的可靠生物学标志。郭双平等研究发现PTEN蛋白的表达异常可能与肾细胞癌的发生、发展有关,是否可作为其他肿瘤的早期诊断标记物,有待于进一步研究。
总之，TAM在不同组织的不同作用机制造成了对生殖器官的副作用，随着外周E2浓度的改变，TAM表现为雌激素受体拮抗剂或激动剂。对于绝经后妇女，TAM体现出激动剂的作用，能使原已萎缩的子宫增大，内膜增厚，增加内膜异常增生和息肉发病率，并使内膜癌的发病率提高。TAM对绝经后妇女子宫内膜的作用机制较为复杂,主要表现在能够引起子宫内膜增生,使细胞增生与凋亡之间失衡,同时抑制机体对肿瘤的免疫反应,作用机制的区别导致了绝经前妇女不同的临床表现。
参考文献
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