枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）对刺参腐皮综合病致病菌的拮抗作用以及对水质的影响

论文摘要

刺参（Apostichopus japonicus）属于棘皮动物门（Echinodermata）海参纲（Holothuroidea）楯手目（Aspidochirota）刺参科（Stichopodidae）仿刺参属（Apostichopus）。刺参含有丰富的胶原成分和蛋白聚糖,还含有大量的黏蛋白及多种氨基酸。最近有研究证明刺参含有防衰老的酸性粘多糖（硫酸软骨素）,具有较广的抗肿瘤及抗凝血的作用,并具有增强机体免疫功能的作用。20世纪80年以来,刺参养殖业迅速发展,与此同时,养殖面积的迅速扩张以及集约化养殖方式下的不规范操作,养殖过程中相继出现一系列病害问题,给刺参养殖业带来了巨大的损失。刺参“腐皮综合病”因其高传染性、高死亡率成为刺参养殖病害研究的重点。其发病特征一般为:感染初期刺参口部先出现感染症状,表现为围口膜松弛,触手对外界刺激反应迟钝,继而出现排脏现象;感染中期刺参身体收缩、僵直,口腹部出现小面积溃疡,形成蓝白色小斑点,逐渐丧失摄食能力;感染末期刺参的病灶变大,溃疡处增多,表皮腐烂面积变大,最后导致刺参死亡,溶化成鼻涕状胶体。我们从养殖池内中分离得到一株菌Bs-1,通过测定Bs-1对C、N利用能力等30多项生理生化指标,结合表型特征,确定Bs-1为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。该菌生长迅速,通过PDB培养基的发酵培养,枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis（Bs-1）能产生抗菌物质,该发酵液能抑制分离自刺参腐皮综合病病灶部位的致病菌C6、TB的生长;所产生的抗菌物质在一定范围内对热、酸碱、变性剂和蛋白酶K均有较好的稳定性。进一步尝试用Bs-1的含菌培养液来控制养殖海水中C6、TB的数量,结果表明每升海水中加入3-4ml培养液(浓度为1×108CFU·ml-1)已能达到较好的抑菌效果;应用Bs-1对养殖水体中各项水质因子进行控制和处理,实验接种菌液量为4、7、10ml(1×108CFU·ml-1)。结果表明:枯草芽孢杆菌能显著降低养殖试验池NH3-N,NO2--N, COD等污染物浓度。使用效果表明:在投加枯草芽孢杆菌菌液后,水质各项指标均优于未投加菌液的对照池,NH3-N,NO2-N, COD污染物的最高去除率分别是:94.5%,90.3%和68.3%,明显改善养殖水体水质条件,因此,Bs-1有望开发成良好的益生菌剂。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1 刺参
• 1.1 刺参的生物学特征、营养价值
• 1.1.1 生物学特征
• 1.1.2 营养价值
• 1.2 养殖的池塘养殖、养殖现状及存在的问题
• 1.2.1 刺参的池塘养殖
• 1.2.2 刺参养殖现状
• 1.2.3 刺参养殖存在问题
• 1.3 刺参养殖病害
• 1.3.1 病害产生原因
• 1.3.2 病害类型
• 1.3.3 刺参腐皮综合病的致病菌种类
• 2 水体微生物制剂
• 2.1 水体微生物制剂国内外的研究进展
• 2.2 微生物制剂的作用机理及分类
• 2.2.1 微生态制剂的作用机理
• 2.2.2 目前微生态制剂的主要种类
• 3 本研究的目的和意义
• 第二章 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的分离和鉴定
• 1 前言
• 2 材料和方法
• 2.1 主要仪器设备和试剂
• 2.2 培养基
• 2.3 枯草芽抱杆菌的分离、纯化和保存
• 2.3.1 样品的采集
• 2.3.2 样品的处理及枯草芽孢杆菌的分离、纯化
• 2.3.3 菌种的保存
• 2.3.4 利用点种法筛选有抑菌效果的的Bs
• 2.4 革兰氏染色
• 2.4.1 试剂配方
• 2.4.2 实验方法
• 2.5 芽孢染色
• 2.5.1 染液制备
• 2.5.2 染色方法
• 2.6 菌体的形态特征观察
• 2.7 细菌的生理生化鉴定
• 2.7.1 生理鉴定实验
• 2.7.2 生化鉴定实验
• 3 实验结果
• 3.1 菌株的菌体形态和菌落特征
• 3.2 革兰氏染色结果及生化指标结果
• 4 讨论
• 第三章 枯草芽孢杆菌对刺参腐皮综合病致病菌的拮抗作用
• 1 前言
• 2 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 供试枯草芽抱杆菌菌株
• 2.1.2 指示菌
• 2.1.3 培养基
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 枯草芽孢杆菌的培养和拮抗活性物质的处理
• 2.2.2 抗菌活性测定
• 2.2.3 BS对海水养殖中的C6、TB菌数量的影响
• 3 实验结果
• 3.1 C6、TB对Bs-1发酵液的敏感性
• 3.2 Bs-1生长曲线和抗菌活性曲线
• 3.3 抗菌活性物质对热的稳定性
• 3.4 抗菌活性物质对pH的稳定性
• 3.5 抗菌活性物质对变性剂和蛋白酶的稳定性结果
• 3.6 Bs-1液控制刺参养殖水中致病菌C6、TB的效果
• 4 讨论
• 5 结论
• 第四章 枯草芽孢杆菌对刺参养殖水体水质的影响
• 1 前言
• 2 实验材料和方法
• 2.1 菌种活化、菌种扩培
• 2.2 实验设计
• 2.3 实验水体水质监测方法
• 3 实验结果
• 3.1 实验过程中对照组和实验组的pH测定结果
• 3.2 微生物菌液对养殖水体NH3-N的影响
• 3.3 微生物菌液对养殖水体N02-N的影响
• 3.4 微生物菌液对养殖水体溶解氧的影响
• 3.5 微生物菌液对养殖水体COD的影响
• 4、讨论
• 5、结论
• 6、发展趋势与前景展望
• 参考文献
• 致谢
• 发表的学术论文