本文主要研究内容
作者刘晓慧（2019）在《短乳杆菌2-34瓜氨酸转运蛋白的鉴定及功能研究》一文中研究指出：从黄酒发酵液中分离的短乳杆菌2-34(Lactobacillus brevis 2-34)具有重吸收瓜氨酸的能力,由于其中瓜氨酸转运机制并不清楚,导致该菌株尚未成功应用于黄酒酿造,以达到减少瓜氨酸含量从而最终降低氨基甲酸乙酯含量的目的。本课题对该菌株中假定的瓜氨酸转运蛋白进行鉴定和功能研究,初步探索瓜氨酸转运机理,为该菌株的应用奠定理论基础。对L.brevis 2-34基因组中两个假定的瓜氨酸转运蛋白编码基因——dcuC和a/o antiporter,利用Cre-loxp系统对二者进行基因敲除,发现基因敲除菌株代谢精氨酸速度变慢,且无法将分泌至发酵液中的瓜氨酸完全重吸收回胞内。此外,ΔdcuC菌株发酵结束后发酵液中瓜氨酸的含量更高,说明DcuC和A/O antiporter蛋白均能够吸收细胞外的瓜氨酸,且DcuC吸收效率更高。以质粒pRSFDuet-1和pETDuet-1为表达载体,分别通过构建多顺反子串联表达系统以及双质粒表达系统,在Escherichia coli C43(DE3)中表达瓜氨酸代谢相关蛋白:ArcD(精氨酸/鸟氨酸转运蛋白)、ArcA(精氨酸降解酶)、ArcB(瓜氨酸降解酶)以及DcuC或A/O antiporter(假定的瓜氨酸转运蛋白)。结果显示,所有重组菌株均可利用精氨酸并分泌瓜氨酸,且与无瓜氨酸转运蛋白的对照组菌株相比,表达了DcuC或A/O antiporter的重组菌株发酵液中瓜氨酸含量更低,进一步证明了DcuC和A/O antiporter均具有吸收瓜氨酸的功能。通过RT-PCR技术监测L.brevis 2-34在含精氨酸培养基中生长时基因的转录情况,发现在对数中期及中后期,即瓜氨酸被迅速重吸收回胞内时,蛋白ArcD编码基因基本不转录,而DcuC和A/O antiporter编码基因仍有较高的转录水平,证明了DcuC和A/O antiporter与瓜氨酸吸收的相关性。通过生物学信息方法,对DcuC和A/O antiporter蛋白结构进行分析,发现二者均含有跨膜结构,为膜蛋白。核心结构域DcuC已被证明在乳酸菌中与瓜氨酸吸收相关。同时二者均含有翻译后修饰位点,可能与其转运瓜氨酸的方向转换有关。
Abstract
cong huang jiu fa jiao ye zhong fen li de duan ru gan jun 2-34(Lactobacillus brevis 2-34)ju you chong xi shou gua an suan de neng li ,you yu ji zhong gua an suan zhuai yun ji zhi bing bu qing chu ,dao zhi gai jun zhu shang wei cheng gong ying yong yu huang jiu niang zao ,yi da dao jian shao gua an suan han liang cong er zui zhong jiang di an ji jia suan yi zhi han liang de mu de 。ben ke ti dui gai jun zhu zhong jia ding de gua an suan zhuai yun dan bai jin hang jian ding he gong neng yan jiu ,chu bu tan suo gua an suan zhuai yun ji li ,wei gai jun zhu de ying yong dian ding li lun ji chu 。dui L.brevis 2-34ji yin zu zhong liang ge jia ding de gua an suan zhuai yun dan bai bian ma ji yin ——dcuChe a/o antiporter,li yong Cre-loxpji tong dui er zhe jin hang ji yin qiao chu ,fa xian ji yin qiao chu jun zhu dai xie jing an suan su du bian man ,ju mo fa jiang fen bi zhi fa jiao ye zhong de gua an suan wan quan chong xi shou hui bao nei 。ci wai ,ΔdcuCjun zhu fa jiao jie shu hou fa jiao ye zhong gua an suan de han liang geng gao ,shui ming DcuChe A/O antiporterdan bai jun neng gou xi shou xi bao wai de gua an suan ,ju DcuCxi shou xiao lv geng gao 。yi zhi li pRSFDuet-1he pETDuet-1wei biao da zai ti ,fen bie tong guo gou jian duo shun fan zi chuan lian biao da ji tong yi ji shuang zhi li biao da ji tong ,zai Escherichia coli C43(DE3)zhong biao da gua an suan dai xie xiang guan dan bai :ArcD(jing an suan /diao an suan zhuai yun dan bai )、ArcA(jing an suan jiang jie mei )、ArcB(gua an suan jiang jie mei )yi ji DcuChuo A/O antiporter(jia ding de gua an suan zhuai yun dan bai )。jie guo xian shi ,suo you chong zu jun zhu jun ke li yong jing an suan bing fen bi gua an suan ,ju yu mo gua an suan zhuai yun dan bai de dui zhao zu jun zhu xiang bi ,biao da le DcuChuo A/O antiporterde chong zu jun zhu fa jiao ye zhong gua an suan han liang geng di ,jin yi bu zheng ming le DcuChe A/O antiporterjun ju you xi shou gua an suan de gong neng 。tong guo RT-PCRji shu jian ce L.brevis 2-34zai han jing an suan pei yang ji zhong sheng chang shi ji yin de zhuai lu qing kuang ,fa xian zai dui shu zhong ji ji zhong hou ji ,ji gua an suan bei xun su chong xi shou hui bao nei shi ,dan bai ArcDbian ma ji yin ji ben bu zhuai lu ,er DcuChe A/O antiporterbian ma ji yin reng you jiao gao de zhuai lu shui ping ,zheng ming le DcuChe A/O antiporteryu gua an suan xi shou de xiang guan xing 。tong guo sheng wu xue xin xi fang fa ,dui DcuChe A/O antiporterdan bai jie gou jin hang fen xi ,fa xian er zhe jun han you kua mo jie gou ,wei mo dan bai 。he xin jie gou yu DcuCyi bei zheng ming zai ru suan jun zhong yu gua an suan xi shou xiang guan 。tong shi er zhe jun han you fan yi hou xiu shi wei dian ,ke neng yu ji zhuai yun gua an suan de fang xiang zhuai huan you guan 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自江南大学的刘晓慧，发表于刊物江南大学2019-10-21论文，是一篇关于黄酒论文,瓜氨酸论文,江南大学2019-10-21论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自江南大学2019-10-21论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：黄酒论文; 瓜氨酸论文; 江南大学2019-10-21论文;