低频重复经颅磁刺激对癫痫大鼠行为及GAD65、NMDAR1表达的影响

论文摘要

目的观察低频重复经颅磁刺激（rTMS）对癫痫大鼠模型痫性发作行为及海马区谷氨酸脱羟酶65（GAD65）、N-甲基-D-天门冬氨酸受体1（NMDAR1）表达的影响,探讨rTMS的抗痫作用及可能机制。方法选择健康雄性wistar大鼠50只,随机分为磁刺激组（包括0.3Hz刺激组、0.5Hz刺激组、0.8Hz刺激组、1.0Hz刺激组）及假刺激组,共5组,每组10只,各组进行相应预处理后,制作氯化锂-匹罗卡品癫痫急性模型,腹腔注射氯化锂3 mmol/kg,注射20h后腹腔注射东莨菪碱1mg/kg,30min后腹腔注射匹鲁卡品30 mg/kg,观察大鼠行为学变化。Ⅳ级以上痫性发作1h后腹腔注射10%水合氯醛（300mg/kg）终止发作,观察一周后,断头取脑切片,行HE染色及免疫组织化学染色观察海马区GAD65和NMDAR1的表达。结果rTMS刺激组大鼠刺激期间未见痫性发作及颅内出血征象,各组大鼠注射匹鲁卡品后均出现痫性发作,表现为点头、甩尾、须动、头面抽动、前肢、后肢抽动、全身抽动、窜动、直立等,49只达到Ⅳ级以上发作,其中有2只终止后死亡。rTMS刺激组大鼠（0.3Hz刺激组、0.5Hz刺激组、0.8Hz刺激组、1.0Hz刺激组）痫性发作潜伏期均比rTMS假刺激组延长,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）,其中0.5Hz刺激组最长;0.5Hz刺激组大鼠出现的痫性发作行为次数均比0.3Hz刺激组、0.8Hz刺激组、1.0Hz刺激组少,且整体发作程度轻,差异有统计学意义（P＜0.05）。rTMS刺激各组大鼠海马神经元GAD65的表达量明显高于rTMS假刺激组（均P＜0.05或P＜0.01）,NMDAR1则明显低于rTMS假刺激组,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）,以0.5Hz刺激组最为明显。结论适量的低频rTMS是比较安全的,可延缓大鼠痫性发作潜伏期、减少痫性发作次数、减轻痫性发作程度;能够降低癫痫大鼠海马区NMDAR1的表达及增强GAD65的表达,可能与其抗痫作用有关。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料和方法
• 一、主要仪器、材料、试剂
• （一） 主要仪器、材料
• （二） 主要试剂
• 二、方法
• （一） 癫痫模型的建立
• （二） 经颅磁刺激方法
• （三） 脑电图记录
• （四） 行为学观察
• （五） 灌注与取材
• （六） 免疫组织化学染色
• 1.试剂配制及载玻片处理
• 2.切片及S-P免疫组化染色
• （七） 图象分析和数据处理
• 结果
• 一、行为学观察结果
• （一） 各组致痫大鼠痫性发作潜伏期比较
• （二） 各组致痫大鼠痫性发作行为及发作程度比较
• （三） 大鼠死亡情况
• 二、脑电图检测结果
• 三、免疫组织化学染色结果
• （一） 形态学观察
• （二） GAD65、NMDAR1阳性表达细胞数比较
• 讨论
• 一、癫痫模型的建立
• 二、rTMS的抗痫作用及刺激参数
• 三、rTMS的抗痫机制
• 四、rTMS在EP应用中的安全性
• 结论
• 问题与展望
• 参考文献
• 综述
• 附录1（实验图片）
• 附录2（简历及发表文章情况）
• 致谢