微小隐孢子虫粘附相关蛋白基因的筛选、表达及免疫保护性研究

论文摘要

为筛选微小隐孢子虫粘附相关蛋白基因和获得疫苗候选抗原基因,本研究构建了微小隐孢子虫T7噬菌体展示文库,用新生犊牛小肠上皮细胞对文库进行筛选,获得新的微小隐孢子虫粘附相关蛋白基因,将该基因在原核系统中表达后,应用免疫荧光技术对粘附相关蛋白定位,并进行动物保护性试验。结果成功构建了微小隐孢子虫T7噬菌体展示文库,文库容量为1.2×107pfu/mL,重组率为96.7%,扩增后文库滴度为2.4×1010pfu/mL。经过5轮筛选,获得了一个新的微小隐孢子虫粘附相关蛋白基因,将其命名为CP12。测序结果显示CP12长度为426bp,含有一大小为315bp的开放阅读框,ScanProsite和InterProScan分析推测的氨基酸序列,包含1个N-糖基化位点,一个N端信号肽和跨膜区。该基因在原核系统中得到了高效表达,表达产物以包涵体形式存在;免疫荧光检测证实CP12蛋白位于子孢子表膜和卵囊壁表面。动物试验结果显示重组CP12蛋白具有一定的保护力。本研究为微小隐孢子虫病的预防奠定了基础。

论文目录

• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 噬菌体展示技术在寄生虫病研究中的应用进展
• 1 噬菌体展示技术的产生
• 2 噬菌体展示系统
• 3 噬菌体展示技术在寄生虫病研究中的应用
• 4 结语
• 第二章 隐孢子虫病免疫学研究进展
• 1 隐孢子虫抗原
• 2 隐孢子虫引起的宿主免疫反应
• 3 免疫诊断
• 4 免疫防治
• 5 结语
• 第三章 微小隐孢子虫粘附相关蛋白研究进展
• 1 微小隐孢子虫粘附相关蛋白
• 2 粘附相关蛋白的应用
• 3 结语
• 第二篇 研究内容
• 第一章 微小隐孢子虫T7 噬菌体展示文库的构建
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 新生犊牛小肠上皮细胞的原代培养
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 微小隐孢子虫粘附相关蛋白基因的筛选
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 CP12 基因的原核表达
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 重组 CP12 蛋白免疫 BALB/c 小鼠的保护性试验
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• 英文摘要
• 攻博期间发表的学术论文及其他成果
• 致谢
• 导师及作者简介