论文摘要
胰腺癌是恶性程度较高的肿瘤之一,临床表现隐匿、进展迅速、预后较差,目前,胰腺癌尚无有效的筛查或早期诊断方法,确诊时往往已是肿瘤晚期。发达国家每年因患胰腺癌死亡人数高达20,000,在美国,被确诊为胰腺癌患者生存中位数仅为6-18月。我国的发病率情况与国外类似,20世纪90年代上海市区人群男女性胰腺癌5年观察生存率分别仅为5.8%和4.3%。近年来,胰腺癌发病率与死亡率逐年呈增长之势。由于胰腺癌发生部位特殊性且易发生早期转移浸润,使胰腺癌手术机会大大减少,放疗和化疗尚缺乏肯定的疗效,解决此问题其关键在于提高胰腺癌早期诊断和改进胰腺癌治疗方法。CD4-CD8-T细胞（double negative T cell,DNT）在正常人的外周血约占总淋巴细胞的1-5%,该DNT细胞表达Fas/FasL、TNF/TNFR,CD3+、CD4-、CD8-、MHCⅠ等]。DNT细胞在免疫调节、免疫抑制、自身免疫及抗肿瘤方面有重要作用。现在研究表明,DNT细胞在抗肿瘤免疫中具有重要作用,可能通过Fas/FasL途径启动肿瘤细胞的凋亡。另有研究表明DNT细胞所分泌的IFN-γ等细胞因子在肿瘤的治疗中有着重要的作用。我们通过流式细胞仪分析胰腺癌患者及健康对照组外周血中CD4-CD8-T细胞的比例,胰腺癌患者手术前后外周血中CD4-CD8-T细胞的比例,评价胰腺癌患者的免疫功能,探讨CD4-CD8-T细胞在抗肿瘤免疫中所起的作用。同时,我们通过检测胰腺癌患者及健康对照组外周血中IFN-γ、IL-4的水平,探讨其与CD4-CD8-T细胞的相关性。我们还进一步通过分离和培养CD4-CD8-T细胞检测其细胞因子的表达水平,为检测CD4-CD8-T细胞对胰腺癌细胞的杀伤作用奠定实验基础。目的:本研究采用流式细胞技术检测胰腺癌患者及健康对照组外周血中CD4-CD8-T细胞的比例,ELISA检测胰腺癌患者及健康对照组外周血中IFN-γ、IL-4的水平,免疫磁珠法分离CD4-CD8-T细胞,分析CD4-CD8-T细胞与胰腺癌的临床病理分期、淋巴结转移、肿瘤大小的相关性以及与IFN-γ、IL-4的水平的相关性来评价CD4-CD8-T细胞在抗肿瘤免疫中所起的作用。方法:（1）流式细胞仪检测CD4-CD8-T细胞实验:胰腺癌患者及健康对照组外周血中CD4-CD8-T细胞占TCRαβ+T细胞的比例。（2）ELISA实验（夹心法）:检测健康对照组及胰腺癌患者手术前后外周血IFN-γ、IL-4的水平及分离培养的TCRαβ+CD4-CD8-T细胞分泌的IFN-γ、IL-4的水平。（3）免疫磁珠分离实验:免疫磁珠法分离TCRαβ+CD4-CD8-T细胞,培养所分离的CD4-CD8-T细胞。结果:（1）健康对照组外周血单个核细胞中CD4-CD8-T细胞占TCRαβ+T细胞的比例为（6.25±2.61）%,胰腺癌患者外周血单个核细胞中CD4-CD8-T细胞占TCRαβ+T细胞的比例为（4.20±1.69）%,可见正常人CD4-CD8-T细胞比例显著高于胰腺癌患者（P<0.01）。术前胰腺癌患者外周血单个核细胞中CD4-CD8-T细胞占TCRαβ+T细胞的比例为（4.20±1.69）%,术后胰腺癌患者外周血单个核细胞中CD4-CD8-T细胞占TCRαβ+T细胞的比例为（5.90±1.27）%,可见术后胰腺癌患者CD4-CD8-T细胞比例显著高于术前胰腺癌患者（P<0.01）。（2）胰腺癌患者外周血中CD4-CD8-T细胞的比例与胰腺癌TNM分期以及是否有淋巴转移有关（P<0.05）,但与患者年龄、性别、组织学分化程度、肿瘤大小无关（P>0.05）。（3）术前胰腺癌患者血清IL-4含量为（86.29±23.29）pg/ml,术后胰腺癌患者血清IL-4含量为（70.91±7.53）pg/ml,术前胰腺癌患者外周血IL-4含量明显高于术后（P<0.01）。术前胰腺癌患者血清IFN-γ含量为（16.44±4.84）pg/ml,术后胰腺癌患者血清IFN-γ含量为（17.45±5.21）pg/ml,手术前后胰腺癌患者外周血IFN-γ含量无明显变化（P>0.05）。（4） TCRαβ+CD4-CD8-T细胞可大量分泌IFN-γ,基本不分泌IL-4结论:（1）CD4-CD8-T细胞与胰腺癌的临床分期以及淋巴转移密切相关,与胰腺癌的组织分化程度和肿瘤大小无关。（2）CD4-CD8-T细胞可分泌IFN-γ,可通过影响细胞因子的表达发挥其抗肿瘤的作用,可能作为肿瘤过继免疫治疗的新途径。
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