论文摘要
目的：以普通冷冻麦管为冷冻载体，联合冷冻保护剂乙二醇(ethylene glycol，EG)和二甲亚砜(dimethyl suloxide，DMSO)玻璃化冷冻人早期卵裂期胚胎，比较它们在不同浓度组合下的冷冻效果，以期获得最佳浓度组合，为临床提供一种有效的玻璃化溶液。方法：以人类体外受精发育至第三天的废弃卵裂早期胚胎为实验对象，以常用的冷冻麦管为载体，冷冻保护剂EG和DMSO分别取20％和25％两个浓度水平，在这两个浓度水平EG和DMSO交叉配伍组成不同的玻璃化溶液，分别对胚胎进行玻璃化冻存，并与程序化慢速冷冻法进行对比。胚胎冻存时间平均为1月，复苏后，通过倒置显微镜下形态学观察，比较胚胎的存活率和继续发育能力，另外，复苏后存活胚胎经罗丹明123(Rhodamine 123)染色，激光扫描共聚焦显微镜摄片分析，测定胚胎线粒体跨膜电位。结果：EG和DMSO在20％和25％两个浓度水平交叉配伍组成的四种玻璃化溶液E20D20、E20D25、E25D20、E25D25都能有效地冻存人早期卵裂期胚胎，胚胎复苏后存活率依次为51.0％、72.7％、62.0％、46.3％，均比程序化慢速冷冻组的存活率39.7％高，其中最高的是20％EG和25％DMSO配伍组，与程序化冷冻组相比差异有统计学意义(P＜0.05)，而其余各组与程序化冷冻组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。复苏后囊胚形成率依次为11.8％、18.2％、18.0％、9.3％，也均高于程序化冷冻组的囊胚形成率8.6％，其中E20D25组最高，但是各组间的差异均无统计学意义(P＞0.05)。复苏后存活胚胎线粒体膜电位的比较，E20D25组膜电位值最高，与未冷冻对照组相比差异无统计学差异，与其它各组相比，除E25D25组外差异均有统计学意义。程序化冷冻组膜电位低于未冷冻对照组，差异有统计学意义(P=0.001＜0.05)。结论：1．以EG和DMSO为主体的玻璃化溶液能有效地冷冻人早期卵裂期胚胎。2．以常用的冷冻麦管为载体，20％EG和25％DMSO配伍组成的玻璃化溶液能获得较好的冷冻效果，可作为临床应用时一种可供选择的玻璃化溶液。3玻璃化冷冻技术比程序化慢速冷冻法能获得更好的冷冻效果，能够有效保存人早期卵裂期胚胎。