线粒体DNA损伤修复系统介导的口腔鳞癌细胞凋亡研究

论文摘要

目的:研究γ射线对口腔鳞状细胞癌细胞线粒体DNA损伤修复系统相关基因Tfam、OGG1和POLG表达的影响,并通过抑制线粒体DNA损伤修复系统而增加γ射线不敏感的口腔鳞状细胞癌细胞的凋亡。方法:体外培养OSC-2和OSC-5细胞,并用γ射线处理,MTT比色法和流式细胞仪检测口腔鳞状细胞癌细胞存活率,气相色谱/质谱（GC/MS）法测定细胞核与线粒体中8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的含量,DNA聚合酶链反应检测mtDNA基因位点的缺失,RNA干涉技术敲除相关基因,半定量逆转录PCR检测相关mRNA的表达水平,Western Blot检测相关蛋白的表达。结果:经过30Gyγ射线处理后OSC-2和OSC-5细胞的存活率分别为（35.33±6.03）%和（75.67±4.16）%;nDNA和mtDNA中8-OHdG的含量增加（P<0.05）;?mtDNA也呈现较高水平。OSC-2和OSC-5细胞经过γ射线处理后Tfam mRNA的水平也都升高,但是OSC-5细胞Tfam mRNA水平存在时相性:即在γ射线处理6小时后Tfam mRNA水平较高。此外,经过γ射线处理的OSC-5细胞中Nrf1向细胞核内转移较OSC-2细胞更为显著,OGG1和POLG的表达及pAKT/PI-3K的活性也较强。在经PI-3K抑制剂（LY 294002）和Akt的抑制剂（Akt InhibitorⅥ）处理的细胞中,Tfam mRNA、OGG1和POLG蛋白表达水平都被下调。在OSC-5细胞株上单独使用γ射线并不会诱导mtDNA的缺失,但是经过γ射线和PI-3K或Akt抑制剂预处理后mtDNA有缺失。另外,LY 294002或InhibitorⅥ处理后能使细胞Tfam mRNA的含量、OGG1和POLG蛋白表达减少而8-OHdG合成增加,细胞的凋亡也增加。Tfam、OGG1和POLG各自的siRNA都下调了相应的蛋白表达水平（P<0.05）。siRNAs转染的细胞经30Gyγ射线处理后凋亡数量有所增加。结论:γ射线能上调射线非敏感的OSC-5细胞中Tfam、POLG和OGG1的表达。Tfam、POLG和OGG1表达水平的上调与PI-3K/Akt信号转导通路的激活有关。此外,通过抑制口腔鳞状细胞癌细胞mtDNA损伤修复系统能增加对γ射线不敏感的OSC细胞的凋亡。

论文目录

• 一 中文摘要
• 二 英文摘要
• 三 前言
• 四 文献综述
• 五 材料与方法
• 六 结果
• 七 讨论
• 八 结论
• 九 参考文献
• 十 致谢
• 十一 英文缩写
• 十二 附图