新疆北疆部分地区奶牛乳房炎病原真菌的调查

论文摘要

奶牛乳房炎是引起奶牛业最严重的疾病之一,引起奶牛乳房炎的主要病原体是细菌已被人们所认识,但目前很多国家和地区发现了真菌引起的奶牛乳房炎逐渐增多,给本病的防治带来难度。本试验对新疆北疆部分地区临床型乳房炎奶样进行了真菌病原分离鉴定,调查了真菌在我国新疆北疆部分地区奶牛乳房炎的感染情况,并对分离株进行了形态学、生化特性及分子生物学鉴定,药物敏感性和动物致病性试验,调查结果表明:1、从121团、142团、150团、126团、128团、129团、130团、西部牧业牛场、伊犁地区及克拉玛依地区10个规模化奶牛场临床型和隐性型乳房炎采集的923份奶样中,检出250份真菌,真菌的检出率为27.09%,各个牛场酵母样真菌的检出率为100%,各个牛场检出率为42.41%-7.0%,以白色念珠菌为主,部分牛场同时检出丝状真菌,检出率为17.40%-7.41%,说明各个地区规模化养殖场奶牛均有不同程度的真菌性乳房炎存在。2、对检出比例最高的酵母样真菌,进一步做芽管试验、微培养法观察出芽和厚壁孢子,并结合发酵和同化试验对分离株进行鉴别,结果均为念珠菌属及念珠菌属中的白色念珠菌。3、根据GenBank中白色念珠菌18SrRNA序列（AB013586）,采用Oligo6.0设计了一对白色念珠菌的特异性引物。提取29株分离株、标准白色念珠菌的染色体DNA,扩增出310bp的特异性条带,阴性对照大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均无扩增带,表明扩增的特异性。最小可以检测到4.1pg的DNA,敏感性较高,可用于临床乳房炎奶样中白色念珠菌的快速检测。4、对各地区主要分离酵母样真菌进行药物敏感性和动物致病性试验,药敏试验结果表明:64株酵母样真菌对制霉菌素表现高敏,两性霉素B表现敏感,对伊曲康唑、氟康唑、酮康唑分别有4、22、10株表现敏感,分别有7、10、27株菌株表现高敏,分别有7、25、21株菌株表现敏感,对头孢芬噻肟、青霉素钾、庆大霉素、硫酸链霉素、5%盐酸土霉素、恩诺沙星、乙酰螺旋霉素、四环素、氟哌酸、氨苄青霉素、磺胺等抗生素均不敏感;用60只小鼠接种酵母样真菌培养物,结果表明:临床乳房炎分离到的真菌60株有56株无致病性,有致病性的4株分离株对氟康唑、酮康唑耐受,这就给临床乳房炎的治疗造成一定的困难。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 符号说明
• 引言
• 第一章 文献综述 奶牛真菌性乳房炎的研究进展
• 一、奶牛乳房炎的流行病学调查
• 二、奶牛乳房炎的现状
• 三、奶牛乳房炎的危害
• 四、奶牛真菌性乳房炎的病因、诊断与检测
• 4.1 乳房炎的诊断
• 4.2 乳房炎的检测方法
• 五、奶牛乳房炎病原真菌的鉴定
• 5.1 菌落形态的观察
• 5.2 显微镜检查
• 5.3 小培养
• 5.4 透明胶带法
• 5.5 组织病理学检查
• 5.6 其他检查法
• 六、奶牛真菌性乳房炎的防治
• 第二章 实验部分
• 试验一:不同地区奶牛场乳房炎病原真菌的初步分离培养与检测
• 1 材料和方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 试验二:白色念珠菌的分离和鉴定
• 1 材料和方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 试验三:PCR 快速检测奶牛乳房炎奶样分离株白色念珠菌方法的建立
• 1 材料和方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 实验四：奶牛乳房炎酵母样真菌分离株药物敏感性和致病性试验
• 1 材料和方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 第三章 结论
• 创新点
• 参考文献（Reference）
• 附录
• 致谢
• 作者简介
• 导师评阅表