论文摘要
不同种群的恒河猴（Macaca mulatta）MHC基因的差异性,很大程度上影响了用其作为动物模型的实验研究结果的稳定性、可靠性和可重复性。因此清晰的了解云南地区恒河猴种群免疫遗传学背景对于运用该种群开展各项研究是非常重要的。针对目前研究热点的恒河猴MHC基因Mamu（Macaca mulatta MHC gene）Ⅰ类基因及Ⅱ类基因部分位点,采用序列特异性引物-聚合酶链式反应分型方法,对云南地区的140只恒河猴（其中92只来源于云南景东野外自然繁殖群、48只来源于本灵长类中心自繁群）的MamuⅠ类基因Mamu-A*01至A*06这6个等位基因,和MamuⅡ类基因Mamu-DRB区的Mamu-DRB1*0303、0305/06、0309、0403、1005/07;DRB3*0403;DRB5*0301/02;DRB6*0101、0103、0104/05这10个等位基因进行检测。统计结果显示MamuⅠ类基因Mamu-A*01至A*06位点结果为阴性;所检测的MamuⅡ类基因Mamu-DRB区10个等位基因,野外群DRB1*0305/06基因阳性率34.8%;DRB1*0309基因41.3%;DRB1*0403基因27.2%;DRB3*0403基因40.2%;DRB6*0101基因40.2%;DRB6*0103基因95.7%。自繁群DRB1*0305/06基因45.8%;DRB1*0309基因58.3%;DRB1*0403基因22.9%;DRB3*0403基因66.7%;DRB6*0101基因54.2%;DRB6*0103基因62.5%,其余位点结果为阴性。与国内其他地区及印度猴群比较发现,云南地区的猴群携带的MHC基因有所不同。另外比较云南地区的野外群与自繁群的MHC基因情况发现,这两个群体间并未出现基因多态性的显著差别。为进一步验证检测出的各位点各等位基因扩增产物的正确性,选取Ⅱ类基因Mamu-DRB区的Mamu-DRB1*0305/06、0309位点进行了部分测序并结合单链构象多态性分析（SSCP）的方法进行深入分析。发现抽取的三个Mamu-DRB1*0305/06位点阳性样本测序结果中2个与GenBank参考序列完全相同,另一个检测出5个碱基的突变;随机抽取的2个Mamu-DRB1*0309位点阳性样本测序结果都与GenBank参考序列完全相同。SSCP检测结果显示有大于80%的阳性样本与测序样本相同,即含同一等位基因,引物针对本次实验研究种群特异性较好。初步证明用SSCP方法进行准确性控制是可行的。直接测序和SSCP两种方法的结合使用,能够避免大规模测序的同时较好的保证检测结果的正确性,大大节约研究成本
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