论文摘要
本研究通过从河南省不同地区猪场的急性病猪中分离鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），了解河南PRRSV流行毒株的类型；通过研究毒力不同的PRRSV感染猪体后病毒增殖与免疫机能变化差异，以进一步探讨PRRSV持续性感染机制。从河南郑州、周口、新乡不同地区的发病猪场中分离到3株PRRSV，分别命名为PRRSVHn-1／06、PRRSV Hn-2／06和PRRSV Hn-3／06，利用RT-PCR方法克隆了3个分离株的ORF5基因，并对ORF5基因和其推导氨基酸序列与不同来源的PRRSV毒株进行比较，结果表明，3个PRRSV分离株之间的ORF5基因及其推导的氨基酸同源性均大于95．5％；它们与北美洲型之间同源性为86．0％-98．7％，而与流行的欧洲型之间的同源性仅为53．1％-54．5％。同时，对分离株ORF5基因的推导氨基酸序列进行变异分析，证实3个分离株均发生了变异，特别是中和位点处第39位推导氨基酸与其它各北美洲株明显不同，这表明河南省流行的PRRSV为北美洲型变异株。将12头30日龄PRRS抗体阴性仔猪随机分为3组，2个试验组分别经滴鼻感染PRRSVHn-1／06分离株和BJ-4弱毒株病毒液，第3组用Marc-145细胞培养液滴鼻作对照，感染后分别在第0、5、11、18、30、40和50天采血，制备血清和白细胞样品。用PRRSV RT-PCR方法检测白细胞、血清样品中PRRSV及其含量；用PRRS ELISA和细胞中和试验分别检测血清样品中抗PRRSV N蛋白抗体和抗PRRSV中和抗体；用流式细胞仪双染色法检测白细胞样品的CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞含量。结果表明：PRRSV Hn-1／06试验组，感染后第5天从血清和白细胞中均检测到PRRSV，感染猪在第18-19天，相继死亡，死亡前，病毒含量、抗N蛋白抗体持续升高，但始终未检测到中和抗体。CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞含量持续显著下降，并且CD4+／CD8+比值始终显著低于对照组；PRRSV BJ-4试验组，感染后第11天检测到PRRSV，迟于PRRSV Hn-1／06试验组。感染后2-3周内，各项检测结果的变化规律与PRRSVHn-1／06试验组基本一致，但变化程度没有PRRSV Hn-1／06试验组明显。在感染第4-7周检测到中和抗体，这一时期病毒含量降低，CD4+T淋巴细胞含量和CD4+／CD8+T淋巴细胞比值显著升高。这说明，PRRSV感染早期的2-3周内，强弱毒株都对体液免疫具有促进作用，但保护性体液免疫此时期未能建立；细胞免疫机能整体被抑制，但弱毒的抑制能力比强毒弱。弱毒在感染4周后，机体产生中和抗体，细胞免疫逐渐建立，可能对清除机体内PRRSV具有重要意义。