论文摘要
bFGF与C-myc在急性白血病中的表达及临床意义前言近年的研究表明，与实体肿瘤一样，血液肿瘤的发生、发展与血管新生和信号传导也有密切的关系。目前这一研究已逐渐成为众多学者关注的热点。在肿瘤形成过程中，异常的血管生成发挥着关键作用。肿瘤生长依赖于血管生成。肿瘤细胞具有诱导血管生成的潜能，这种潜能必需在生长因子的刺激下才能转化为发挥作用的表型。bFGF是最强的血管生长因子之一，是一种十分重要的正性调控因子。近年来，研究表明，白血病患者体液中bFGF水平亦较正常对照明显升高，骨髓中有明显的血管新生现象。体内体外的各种实验均证实了bFGF对于血管内皮细胞的促增值活性。人们发现白血病细胞有bFGF和／或bFGFR的异常表达，bFGF可以通过自分泌或旁分泌直接刺激白血病细胞，通过加强酪氨酸激酶信号传导通路水平促进细胞增殖。C-myc蛋白是一个终末分化的负性调节因子，在生长控制、分化发育和细胞凋亡中均有重要作用。需有第2个生长信号（关键性生长因子）刺激，通过酪氨酸激酶信号传导通路调节核转录因子C-myc的表达，才能抑制细胞凋亡，促使细胞进入增生状态导致肿瘤发生。本研究实验组为急性非淋巴白血病（ANLL）初诊患者58例，急性淋巴白血病（ALL）初诊患者22例，对照组为ANLL完全缓解患者（CR）40例，ALL完全缓解患者（CR）4例，血小板减少性紫癜患者（ITP）20例。应用RT-PCR方法检测bFGF和C-myc在细胞中的表达，目的在于研究血管新生和bFGF与C-myc信号传导通路之间的内在联系。可以更深刻的认识急性白血病，并为急性白血病的治疗提供新的靶点。实验材料与方法1、实验材料（1）药品与试剂：MML-V（Promega公司），RNA酶抑制剂，随机引物，TAq酶（上海生工生物工程技术服务有限公司），PBS液，dNTPs，5×逆转录反应缓冲液，10×PCR缓冲液，特异引物（上海生工生物工程技术服务有限公司），琼脂糖。（2）实验器械：低温离心机，RT-PCR仪，电泳仪，紫外透射反射分析仪2、实验方法研究对象为ANLL初诊患者58例，ALL初诊患者22例。对照组为ANLL（CR）40例，ALL（CR）4例，血小板减少性紫癜患者（ITP）20例。收集患者的骨髓液行分离出单个核细胞，提取细胞总RNA及cDNA的合成后，根据引物的反应条件行PCR反应。取15μl扩增产物经2％琼脂凝胶电泳，观察结果并拍照。根据资料的性质选用x2检验和精确概率法，使用SPSS11.0统计学软件对实验结果进行处理。实验结果1、bFGF的表达bFGF在初诊ANLL的表达较CR高，x2检验P值小于0.05，有统计学显著差异；初诊ALL的表达较CR高，x2检验P值小于0.05，有统计学显著差异。bFGF在初诊ANLL的表达较ITP高，x2检验P值小于0.05，有统计学显著差异；初诊ALL的表达较ITP高，x2检验P值小于0.05，有统计学显著差异。2、C-myc的表达C-myc在初诊ANLL的表达较CR高，x2检验P值小于0.05，有统计学显著差异；初诊ALL的表达较CR高，x2检验P值小于0.05，有统计学显著差异。C-myc在初诊ANLL的表达较ITP高，x2检验P值小于0.05，有统计学显著差异；初诊ALL的表达较ITP高，x2检验P值小于0.05，有统计学显著差异。讨论实体瘤中的血管新生现象已被人们普遍认可。近年人们发现白血病中同样有血管新生现象的存在。bFGF是成纤维细胞生长因子（FGFs）中的一员，是最强的血管生长因子之一。Gruber等报道毛细胞性白血病（HCL）患者的血清和骨髓中检测到高水平的bFGF，并且具有生物学活性。异常升高的bFGF可刺激纤溶酶原激活物的释放，从而产生纤溶酶，，纤溶酶一方面可以降解细胞外基质，参于血管新生的过程。bFGF还可通过自分泌／旁分泌机制诱导血管内皮细胞表达VEGF，进一步证实了bFGF与肿瘤血管新生的密切关系。本文用RT-PCR方法检测bFGF在AML和ALL骨髓细胞的例数高于正常对照组（P＜0.05），提示bFGF在急性白血病有较高的表达，与急性白血病的发生发展有密切关系。C-myc基因表达失控在肿瘤发生中起关键作用。一些研究已经证实白血病细胞株HL-60细胞存在C-myc基因高表达。本实验检测出C-myc在初诊ALL和ANLL表达的例数高于正常对照组（P＜0.05）与上述结论相符。许多研究证实，肿瘤的发生与生长因子信息传递通路中一些癌基因蛋白的参与有关。生长因子与其受体相结合，酪氨酸激酶活性增高，激活Ras-MAPK通路，最终信息传至核内，激活核内的转录因子C-myc，属于促生长的早期应答蛋白。本实验在初诊ALL和ANLL中检测到bFGF和C-myc均升高，由此可推测可能bFGF通过酪氨酸激酶信号传导通路调节转录因子C-myc的表达，促进白血病的发生。对bFGF和C-myc的检测使我们认识到血管新生和信号传导在白血病的发生和发展过程中具有重要意义。迄今为止白血病的预后很差，其治疗手段仍以化疗和骨髓移植为主，生存率低，而且影响病人的生存质量。因此，针对靶点的抗血管生成和抑制信号传导的治疗将成为急性白血病治疗的新途径结论bFGF和C-myc在急性白血病有较高的表达，提示与急性白血病的发生、发展有密切关系，为急性白血病治疗提供新的靶点；bFGF和C-myc可能存在相关性