用“C”株猪瘟兔化弱毒感染兔模型对中药复方“病毒克”抗病毒疗效的评价

论文摘要

为了提高中药复方“病毒克”的临床疗效，扩大临床运用范围，探讨中药复方“病毒克”抗病毒作用机理，为中药复方剂型改革和工业化生产提供实验依据。本研究：①采用正交设计结合单因素考察，以水提后的浸膏重量为考察指标，选用L9（34）正交表设计试验，对浸泡时间、用水量、煎煮时间、煎煮次数四个水提因素进行优化。②以猪瘟兔化弱毒（Hog cholera lapinized virus, HCLV）“C株”为模式病毒，以GAPDH、ACTB为内参基因，以实时荧光定量PCR（fluorescencequantitative PCR，FQ-PCR）作为检测手段，猪瘟病毒校正值作为检测指标，研究中药复方对兔感染HCLV后，脾脏、肠系膜淋巴结病毒增殖的变化情况。③以猪瘟兔化弱毒“C株”为模式病毒，以ELISA为检测手段，IFN-γ浓度为检测指标，研究中药复方对兔感染HCLV后IFN-γ的动态变化情况。④以猪瘟兔化弱毒“C株”为模式病毒，以体温为检测指标，研究中药复方对兔感染HCLV定型热反应的影响。研究结果表明：①中药复方“病毒克”水提浸膏最佳工艺为：饮片混合，浸泡0.5h、12倍加水量、煎煮3次、煎煮时间1h，水提浸膏收率为57.2%，接近正交方案中的最高值。②脾脏中，攻毒后72h时低剂量组（2.5g／kg）病毒含量显著高于对照组和高剂量组（10g／kg）（P<0.05），144h对照组病毒含量显著高于其他三组（P<0.05）；肠系膜淋巴结中72h对照组病毒含量显著高于低剂量组和高剂量组（P<0.05）。③中剂量（5g／kg）和高剂量药物组能促进兔IFN-γ的产生，连续给药5次后的48h明显高于对照组和低剂量药物组（P<0.05），72h极显著高于对照组和低剂量药物组（P<0.01）；高剂量中药组不仅能诱导健康兔IFN-γ的产生，在HCLV引起IFN-γ下降的情况下作用更为明显（P<0.01）。④中药复方“病毒克”浸膏能缩短兔HCLV模型定型热反应潜伏期、延长稽留热时间，促进体温下降的作甪。中药复方“病毒克”水提工艺优化结果结合工业化生产特点，最佳工艺组合：浸泡0.5小时、12倍加水量、煎煮3次、煎煮时间1小时，浸膏收率为57.2%，接近正交方案中的最高值。大剂量连续多次灌胃家兔后，在攻毒后的72h能显著抑制猪瘟兔化弱毒“C株”病毒在肠系膜淋巴结中的增殖，对脾脏中HCLV的增殖具有一定的抑制作用。大剂量连续多次灌胃家兔后，能明显诱导兔IFN-γ的产生，尤其是大剂量中药不仅能诱导健康兔IFN-γ的产生，而且在猪瘟兔化弱毒疫苗“C株”引起兔IFN-γ下降的情况下表现得极为突出。在攻毒72h后，中药复方“病毒克”对兔HCLV模型具有促进体温迅速下降并完全恢复到正常水平的作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 文献综述
• 1 抗病毒中草药（复方）研究概况
• 1.1 中草药（复方）化学成分提取工艺研究
• 1.2 中草药（复方）抗病毒作用机理研究
• 1.2.1 直接抗病毒作用
• 1.2.2 间接抗病毒作用
• 2 荧光定量 PCR 在中药研究中的运用
• 3 ELISA 在中药研究中的运用
• 4 中医动物模型研究概况
• 4.1 中医“证”动物模型的研究原则
• 4.1.1 以中医辨证论治理论和整体观念为指导
• 4.1.2 模型症状要符合中医临床
• 4.1.3 能用相应药物反证治疗
• 4.1.4 模型的重复性
• 4.2 兔 HCLV 模型在抗病毒中药研究中的特点
• 第2章 引言
• 2.1 中药复方“病毒克”的研究概况
• 2.2 本研究的目的及思路
• 第3章 中药复方“病毒克”总化学成分（浸膏）提取工艺研究
• 3.1 材料
• 3.1.1 中药复方“病毒克”
• 3.1.2 仪器
• 3.2 方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 水提 L9（34）正交试验结果
• 3.3.2 提取工艺可靠性和重复性检测结果
• 3.4 结论与讨论
• 第4章 中药复方“病毒克”对兔 HCLV 模型组织病毒含量的影响
• 4.1 材料
• 4.1.1 病毒
• 4.1.2 主要试剂
• 4.1.3 主要仪器
• 4.1.4 受试药物
• 4.2 方法
• 4.2.1 实验动物分组及处理
• 4.2.2 SYBR Premix Ex TaqTMⅡ实时荧光定量 RT-PCR 方法的建立
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 HCLV、GAPDH、ACTB 目的片段的特异性扩增
• 4.3.2 HCLV、GAPDH、ACTB 标准阳性质粒的构建及鉴定
• 4.3.3 SYBR Premix Ex TaqTMⅡ荧光定量 RT-PCR 条件优化结果
• 4.3.4 标准曲线的建立
• 4.3.5 SYBR Premix Ex TaqTMⅡ荧光定量 RT-PCR 方法的灵敏性
• 4.3.6 SYBR Premix Ex TaqTMⅡ荧光定量 RT-PCR 方法的可重复性
• 4.3.7 小结
• 4.3.8 兔 HCLV 模型组织病毒含量
• 4.4 结论与讨论
• 第5章 中药复方“病毒克”对兔 HCLV 模型 IFN-γ影响的研究
• 5.1 材料
• 5.1.1 病毒和受试药物
• 5.1.2 主要试剂和仪器
• 5.1.3 受试药物的制备
• 5.2 方法
• 5.2.1 实验动物及分组处理
• 5.2.2 方法
• 5.3 结果与分析
• 5.3.1 临床体征
• 5.3.2 标准品结果
• 5.3.3 各组实验动物组内 IFN-γ的变化情况
• 5.3.4 各组实验动物组间 IFN-γ的变化情况
• 5.4 结论与讨论
• 第6章 中药复方“病毒克”对兔 HCLV 模型体温曲线影响的研究
• 6.1 材料
• 6.1.1 实验器材
• 6.1.2 实验动物
• 6.1.3 猪瘟兔化弱毒疫苗
• 6.1.4 受试药物
• 6.2 方法
• 6.2.1 受试药物的制备
• 6.2.2 实验动物分组及处理
• 6.2.3 检测指标
• 6.3 结果与分析
• 6.3.1 临床体征
• 6.3.2 体温
• 6.3.3 体温曲线
• 6.4 讨论与结论
• 第7章 结论、存在的问题、后续研究
• 7.1 主要结论
• 7.2 本研究的创新点
• 7.3 存在的问题及后续研究
• 参考文献
• 附录1 缩略词表
• 发表论文情况
• 致谢