论文摘要
背景和目的:肾脏是衰老较快的器官,肾脏衰老的主要病理特点是肾小球局灶硬化、肾小管萎缩、间质纤维化和炎细胞浸润。本实验室的早期研究发现,ILK可以加速肾脏衰老和纤维化过程,然而ILK促进肾纤维化进而参与肾脏衰老的机制目前尚不完全清楚。研究发现ILK的活化可下调肠、乳腺和肾小管上皮细胞E-cadherin的表达,而E-cadherin则在某些组织中参与细胞间连接的调控。晚近有研究发现TGFβ1可通过connexin43促进心肌成纤维细胞向纤维母细胞分化,因此我们假设ILK参与肾纤维化和肾脏衰老的过程可能是通过调控细胞间通讯实现的。由于connexin43是肾脏细胞最重要的细胞间连接蛋白,因此本研究首先观察人血浆ILK水平和大鼠肾组织ILK、connexin43表达随增龄的变化;然后观察正反义转染ILK基因对系膜细胞connexin43表达的影响;并分别应用AKT、GSK3的特异性抑制剂LY294002、SB415286抑制系膜细胞AKT和GSK3磷酸化,观察其对connexin43表达影响,进一步探讨ILK调控connexin43参与肾脏衰老的机制。方法:（1）采用整群随机抽样的方法,抽取80例健康北京社区居民,其中老年组62例,年龄68.36±6.16岁,青年组18例,年龄21.57±2.92岁。ELISA法检测血浆中ILK含量。青年组和老年组ILK水平的比较应用t检验,采用pearson相关和多元线性回归分析影响老年组ILK水平的因素。（2）留取3月龄、24月龄Wistar大鼠（n=6）肾组织和血清标本,检测血肌酐、尿素氮,石蜡切片行PAS染色,间接免疫荧光法检测肾组织ILK、connexin43表达,RT-PCR、Western Blot法检测肾组织内ILK、connexin43、FN、COLⅣ表达。（3）将ILK质粒转染至大鼠肾小球系膜细胞中,G418筛选后得到稳定表达的ILK阳性系膜细胞,并应用ILK SiRNA瞬时转染系膜细胞,观察上调和下调ILK基因表达对系膜细胞connexin表达的影响;应用RT-PCR、Western blot检测上调ILK基因对系膜细胞FN、COLⅣ、P16、P21表达的影响;分别提取细胞浆和细胞核蛋白,观察上调ILK基因对系膜细胞胞浆和胞核AKT、磷酸化AKT表达的影响。应用LY294002、SB415286抑制正常系膜细胞AKT和GSK3磷酸化,观察对connexin43表达的影响;并抑制ILK阳性系膜细胞AKT磷酸化,观察ILK抑制connexin43表达是否经由AKT途径。结果:（1）北京社区健康人群老年组血浆ILK水平高于青年组（p＜0.01）,老年组ILK水平和年龄正相关（r=0.417,p＜0.05）,多元回归分析显示年龄是影响血浆ILK水平的独立危险因素。（2）24月龄大鼠体重、肾重、相对肾重、血肌酐、尿素氮水平均高于3月龄组（p＜0.05,p＜0.01）,PAS染色显示24月龄大鼠出现肾小球局灶硬化,局灶肾小管萎缩,间质炎细胞浸润;RT-PCR、Western blot显示肾组织内FN、COLⅣ表达升高（p＜0.05）,ILK表达升高（p＜0.05,p＜0.01）和connexin43表达下降（p＜0.05,p＜0.01）。（3）体外研究显示ILK过表达可导致系膜细胞connexin43表达降低（p＜0.05）,下调ILK表达则观察到相反结果（p＜0.05,p＜0.01）;ILK过表达还可导致系膜细胞胞浆和胞核磷酸化AKT表达升高（p＜0.01）、磷酸化GSK3表达升高（p＜0.01）、细胞增殖能力降低以及SA-βgal阳性细胞增多;抑制AKT的磷酸化后正常系膜细胞connexin43表达升高（p＜0.05）,而抑制GSK3磷酸化则无上述作用;应用LY294002抑制ILK阳性系膜细胞AKT的磷酸化则可以观察到ILK对connexin43的负向调控作用减弱。结论:人血浆ILK水平随增龄升高,年龄是ILK升高的独立危险因素,提示ILK可作为评价人群自然衰老的指标。老年大鼠肾组织ILK表达升高和connexin43表达的降低,并出现FN、COLⅣ等的表达增加。ILK可通过AKT途径而非GSK3途径调控connexin43的表达从而参与系膜细胞衰老,ILK的过表达可导致细胞浆和细胞核磷酸化AKT的表达增加,ILK对connexin43的调节可能是通过磷酸化AKT的核转位从而在转录水平实现的。
论文目录
相关论文文献
- [1].胃癌组织中VEGF和ILK的表达及意义[J]. 中国当代医药 2015(20)
- [2].ILK与VEGF在肝细胞癌中的表达及相互关系[J]. 首都医药 2013(22)
- [3].骨肉瘤中Bcl-2和ILK表达的生物学意义研究[J]. 辽宁医学杂志 2011(01)
- [4].ILK在宫颈癌组织中的表达及宫颈癌细胞侵袭能力的影响[J]. 中国妇幼健康研究 2016(01)
- [5].ILK和MMP-9在乳腺癌组织的表达及临床病理分析[J]. 中国医学工程 2015(08)
- [6].整合素连接激酶(ILK)在早期肝病、肝硬化及肝细胞癌组织中表达及临床意义[J]. 首都医药 2013(24)
- [7].ILK和MMP-9在胃癌及其侵袭、转移中的表达及意义[J]. 胃肠病学和肝病学杂志 2015(01)
- [8].骨桥蛋白、整合素ανβ3及ILK表达异常在子宫内膜癌中的相关性研究[J]. 现代医院 2013(07)
- [9].宫颈鳞癌及癌前病变组织中ILK、PTEN的表达情况[J]. 中国当代医药 2010(10)
- [10].辛伐他汀对高脂血症大鼠肾小管间质病变及其ILK表达的影响[J]. 中国病理生理杂志 2009(09)
- [11].抑制整合素连接激酶(ILK)表达对大鼠肾小球系膜细胞细胞间隙连接蛋白43表达的影响[J]. 解放军医学杂志 2008(11)
- [12].过表达ILK通过下调Caspase-3活性降低脑胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感性[J]. 慢性病学杂志 2017(05)
- [13].乳腺肿瘤中整合素连接激酶(ILK)的表达及临床意义[J]. 中国医药导报 2009(02)
- [14].ILK和MMP-13在非小细胞肺癌中的临床意义及表达[J]. 黑龙江医药科学 2017(01)
- [15].ILK介导Akt信号通路诱导人晶状体上皮细胞转分化的研究[J]. 安徽医科大学学报 2016(11)
- [16].ILK基因RNAi慢病毒表达载体的构建与鉴定[J]. 中华肿瘤防治杂志 2012(24)
- [17].结肠癌中ILK及p53的表达情况及其预后意义[J]. 中国当代医药 2013(07)
- [18].ILK、ER在子宫内膜癌组织中的表达及相关性分析[J]. 中国当代医药 2010(09)
- [19].Hsp90及其受体蛋白ILK在胃癌及癌前病变中的表达及意义[J]. 中国中西医结合消化杂志 2016(04)
- [20].p27和ILK在胃癌及癌前病变中的表达及意义[J]. 现代肿瘤医学 2010(01)
- [21].ILK及E-cadherin在结肠癌中的表达及其预后意义[J]. 中国中西医结合消化杂志 2017(08)
- [22].VEGF、ILK、CD151在肿瘤血管生成及胶质瘤中的研究进展[J]. 承德医学院学报 2017(05)
- [23].真武汤对肾间质纤维化大鼠ILK信号通路影响的实验研究[J]. 中医药信息 2014(01)
- [24].卵巢肿瘤组织中ILK和PTTG的表达及其与微血管密度的关系[J]. 临床与实验病理学杂志 2013(06)
- [25].ILK对膀胱癌细胞增殖、凋亡、侵袭和活性氧的影响[J]. 山西医科大学学报 2020(05)
- [26].ILK和TGF-β1在实验性大鼠肝纤维化中的表达和意义[J]. 安徽医药 2014(09)
- [27].ILK、nm23-H_1在妊娠滋养细胞疾病中的表达及其临床意义[J]. 吉林医学 2011(04)
- [28].ILK在眼睑结膜鳞状细胞癌中的表达及其临床意义[J]. 实用防盲技术 2017(02)
- [29].大鼠角膜碱烧伤后ILK和VEGF的表达与角膜新生血管的相关性研究[J]. 国际眼科杂志 2012(02)
- [30].miRNA沉默ILK基因对人膀胱癌T24细胞侵袭功能的影响[J]. 生命科学研究 2012(02)